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浙江自噬透射电镜

来源: 发布时间:2023年02月01日

蟾蜍灵(bufalin)是中药蟾酥中的主要成分之一,研究表明其可诱导多种肝ai细胞自噬。蟾蜍灵可激huo肝aiHepG2细胞自噬和凋亡,增强自噬Beclin-1(BECN-1)的表达,促进I型微管相关蛋白1轻链3(LC3-I)向II型微管相关蛋白1轻链3(LC3-II)的转化,抑制p62和mTOR信号通路表达,AMPK抑制剂可降低蟾蜍灵诱导自噬的作用,提示蟾蜍灵诱导的自噬作用可能是AMPK-mTOR依赖性的。蟾蜍灵可通过抑制Akt/mTOR通路,上调LC3-II、Beclin-1、Atg5、Atg7和Atg12蛋白的量,诱导SK-HEP-1细胞自噬性死亡。此外,蟾蜍灵还可诱导Huh7、Hep3B和HA22T细胞自噬,抑制细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,其诱导自噬的机制可能与激huoJNK通路,上调中流坏死因子(TNF)、BECN-1、Atg8水平相关。在自噬的情况下,荧光显微镜下RFP-GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以黄色斑点的形式表现出来。浙江自噬透射电镜

大自噬,也就是通常说的自噬,是真核细胞蛋白降解的途径之一。自噬可以被描述为细胞质内的成分(细胞器、蛋白等)被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体,进而传递到溶酶体进行降解的过程。详细来说,自噬过程与内涵体途径密不可分。一方面,自噬体能够与晚期内体融合形成中间囊泡终形成自噬溶酶体;另一方面,自噬体能够直接与溶酶体融合形成自噬溶酶体。无论通过哪条途径,自噬溶酶体较终通过酸性水解酶将细胞器、蛋白等消化分解。细胞本底水平的自噬发生在营养充足的条件下,可保护细胞免受错误折叠蛋白或受损细胞器的影响,从而防止某些疾病的发生(如神经退行性疾病和病症)。饥饿等也可诱导自噬的发生,通过降解大分子物质和细胞器为细胞活动提供营养和能量。苏州单荧光自噬自噬信号通路受到严密调控,在基础水平上起到重要管家作用,可使细胞在多种应力条件下继续存活。

当自噬体与溶酶体融合后,形成自噬溶酶体。自噬性溶酶体是一种自体吞噬泡,作用底物是内源性的,即细胞内的蜕变、破损的某些细胞器或局部细胞质。这种溶酶体普遍存在于正常的细胞内,在细胞内起“清道夫”作用,作为细胞内细胞器和其它结构自然减员和更新的正常途径。在组织细胞受到各种理化因素伤害时,自噬性溶酶体大量增加的,因此对细胞的损伤起一种保护作用。自噬性溶酶体的作用底物是内源性的,即来自细胞内的衰老和崩解的细胞器或局部细胞质等。它们由单层膜包围,内部常含有尚未分解的内质网、线粒体和高尔基复合体或脂类、糖原等。正常细胞中的自噬性溶酶体在消化、分解、自然更替一些细胞内的结构上起着重要作用。当细胞受到药物作用、射线照射和机械损伤时,其数量明显地增多。在病变的细胞中也常可见到自噬性溶酶体。

自噬的功能:(1)饥饿应答时的作用,在不同的如肝脏或在培养细胞中,氨基酸的匮乏会诱导细胞产生自体吞噬,由自体吞噬分解大分子,产生在分解代谢和合成代谢过程中所必须的中间代谢物。(2)在细胞正常活动中的作用,如在动物的非正常发育、老化和分化过程中,自体吞噬负责降解正常的蛋白以重新组建细胞。尽管通常人们认为自体吞噬不具有选择性,但是在某些病理和压力条件下,通过自体吞噬能选择性地隔离某些细胞器,如线粒体、过氧化物酶体等。(3)在某些组织中的特定功能,如黑质的塞梅林神经节中,多巴胺能神经元中的神经黑色素的合成就需要把细胞质中的多巴胺醌用AV包被隔离起来。细胞能利用自噬来消灭受损的蛋白质和细胞器,这个过程对抵抗人类的衰老带来的负面影响有举足轻重的意义。

自噬是一系列自噬体结构演变的过程,由自噬相关基因(autophagy-relatedgene,ATG)执行精细的调控。在饥饿、低氧、药物等因素作用下,待降解的细胞成分周围会形成双层结构分隔膜,随后分隔膜逐渐延伸,较终将待降解的胞浆成分完全封闭形成自噬体(autophosome);自噬体形成后将通过细胞骨架微管系统运输至溶酶体,二者融合形成自噬溶酶体(autopholysome);较终其内容物在溶酶体酶作用下被细胞降解利用。目前研究发现自噬调节涉及多种信号通路,其中以腺苷单磷酸活化蛋白激酶(adenosinemono-phosphateactivatedproteinkinase,AMPK)及哺乳动物雷帕霉素受体(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)信号通路为调控中心。AMPK促进自噬发生,而mTOR阻止自噬发生。此外,许多经典的凋亡信号通路或蛋白被发现与自噬调控之间存在着复杂的交织。自噬功能不全的细胞易于坏死,但是坏死组织产生的细胞因子(包括部分生长因子)反而会促进病变的生长。浙江自噬透射电镜

异钩藤碱可诱导神经细胞自噬。浙江自噬透射电镜

柴胡中提取的单体成分柴胡皂苷d通过增加细胞质游离Ca2+浓度,激huoCaMKK[1]AMPK-mTOR通路诱导MCF-7细胞自噬性死亡。 另外,有学者报道,人参皂苷F2诱导乳腺ai干细胞CSC凋亡,且通过增加Atg7、Beclin-1、LC3B蛋白的量,增加LC3-GFP荧光蛋白和自噬泡诱导自噬,联合自噬抑制剂则能增强人参皂苷F2诱导的细胞凋亡。白藜芦醇诱导MDA-MB231细胞凋亡,增加LC3-II蛋白的量诱导自噬,但联合自噬抑制剂可增强白藜芦醇诱导MDA-MB231细胞凋亡。研究发现,β-榄香烯处理MGC-803和SGC[1]7901细胞可观察到LC3点状聚集、LC3-II蛋白水平增加、Atg5-Atg12相关蛋白上调,并且PI3K/Akt/ mTOR/p70S6K1通路受抑制,表明β-榄香烯可诱导胃ai细胞自噬,其机制可能与PI3K/Akt/mTOR/ p70S6K1通路相关。浙江自噬透射电镜

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