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安徽全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导

来源: 发布时间:2022年11月08日

    细胞鉴定:表面标志物鉴定(流式细胞术),分化能力鉴定(间充质干细胞成骨分化、间充质干细胞成脂分化、间充质干细胞成软骨分化),核型分析;细胞转染:慢病毒、腺相关病毒、腺病毒、质粒、microRNA、lncRNA等转染服务;免疫学分析:免疫细胞化学、免疫荧光、激光共聚焦、westernblot、Co-IP、ELISA等;分子技术:qPCR、PCR、***定量PCR等。关键词:人骨髓间充质干细胞、人脐带间充质干细胞、人脐带血间充质干细胞、人羊膜间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、大鼠骨髓间充质干细胞、大鼠脂肪间充质干细胞、小鼠骨髓间充质干细胞、小鼠脂肪间充质干细胞、兔骨髓间充质干细胞、犬骨髓间充质干细胞、犬脂肪间充质干细胞、猪骨髓间充质干细胞、细胞培养、原代细胞弗元生物,中国自己的生物品牌。迈杰转化医学基于基因组学、蛋白质组学、细胞组学及病理学等综合性转化医学全平台。安徽全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导

    包括67个y-str基因座和1个性别决定基因座amelogenin)。相比于illumina公司的forenseqtmdnasignatureprepkit,本发明提供的试剂盒中包含41个新的y-str基因座,能提供更多新的遗传信息。而且本发明提供的复合扩增体系中所有y-str基因座的**大扩增子长度都小于300bp,而forenseqtmdnasignatureprepkit中有约%(7/24)基因座的**大扩增子长度大于300bp,不利于降解检材的分析。本发明提供的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验摸索获得的,试剂盒中的引物具有不可替换性;即引物被替换后,部分基因座将会被抑制且抑制效果不可预知。实验证明,采用本发明提供的试剂盒检测标准品2800m中68个基因座的str分型,分型结果准确。本发明具有重要的应用价值。附图说明图1为67个y-str基因座的pcr扩增产物的长度范围分布。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。标准品2800m为promega公司的产品,产品目录号为dd7251。 湖南多靶点迈杰转化医学NGS平台诚信合作迈杰转化医学严格按照IS013485标准规定建立质量体系。

    其中扩增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取标准品2800m,用超纯水稀释,获得浓度为1ng/μl的标准品2800m水溶液。3、以标准品2800m水溶液为模板,分别采用引物混合物1和引物混合物2进行pcr扩增,得到pcr扩增产物。每条引物在反应体系的浓度均为μm。4、同实施例2步骤一中3。5、同实施例2步骤一中4。6、同实施例2步骤一中5。检测结果见表6。结果表明,实施例1制备的试剂盒中的引物被替换后,部分基因座被抑制且引物混合物1和引物混合物2的抑制情况不同。表6注:n与其后数字表示一段碱基序列,其后数字表示序列的碱基数目;“-”表示未获得基因型。上述结果表明,实施例1制备的试剂盒中引物具有不可替换性,本发明的发明人经过大量实验摸索,才获得了试剂盒中的引物组合及引物浓度。

    二、一代测序简介1、发生和发展***代测序技术是Sanger于20世纪70年代中末期发明的双脱氧链终止测序法,手动测序,用同位素标记,Sanger也因此获得其第2个诺贝尔奖(在Sanger发明双脱氧链终止测序法前WalterGilbert发明化学降解法测定DNA序列);80年代出现***台自动化测序设备,荧光标记代替同位素,计算机图像识别;90年代中期测序仪重大改进,毛细管电泳替代凝胶电泳;2003年完成人类基因组测序工作。2、基本原理以单条DNA链为模板合成互补链,在DNA复制过程中,合成原料(2’脱氧核苷酸dNTP)中掺入标记过的2’3’ddNTP(双脱氧链终止测序法由此而来),就会产生一系列末端终止的DNA链,并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。经PCR扩增反应,可以得到一系列长度不同的产物,由于ddNTP带有荧光标记,对产物进行电泳分离,并用相应的仪器进行检测,就可以读出模板的序列。链终止法反应的**仍是PCR法。作者:心平气和链接:源:知乎著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权,非商业转载请注明出处。 PMS2抗体试剂 苏苏械备20180570号.

    且是随机错误,而不是聚集在读取的两端;③数据可实时读取;④通量很高(30x人类基因组有望在***内完成);⑤起始DNA在测序过程中不被破坏;⑥样品制备简单又便宜;⑦可直接测序RNA。2、PacBioSMRT纳米孔+荧光可逆终止dNTP技术原理:PacBioSMRT技术其实是应用了边合成边测序的思想(使用4色荧光标记4种碱基),其超长读长的关键在于使用了活性持久且高保真的DNA聚合酶,并以SMRT芯片为测序载体(ZMW原理)。优势劣势:①SMRT技术的测序速度很快,每秒约10个dNTP;②错误率较高,达到15%,出错随机,可通过多次测序来进行有效的纠错(如使用Sparc对30X的数据进行分析,错误率可达到);③原始DNA不被破坏;④读长可达10kbp。3、HelicosHeliscope单分子荧光可逆终止技术原理:该技术基于边合成边测序的思想,将DNA随机打断成小片段分别进行dNTP荧光标记,经过不断地重复合成、洗脱、成像、淬灭过程完成测序。主要步骤:①制备:DNA打断加polyA+Cy3②测序:dNTP荧光可逆终止特点:①读取长度约为30-35bp,每个循环的数据产出量为21-28Gb;在测序完成前,各小片段的测序进度不同;②可根据同聚物的合成会导致荧光信号的减弱这一特点来推测同聚物的长度。覆盖多个主流IHC自动染色平台,适用范围广。浙江组织标本迈杰转化医学NGS平台郑重承诺

迈杰拥有StarLIMS实验室信息化管理系统,中心实验室获得了中国CNAS ISO 17025实验室认可、美国CAP认证。安徽全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导

    本发明涉及生物技术领域,特别涉及二代测序文库构建技术。背景技术:二代测序由于其超高的测序能力在科研和临床中具有极为重要的应用。二代测序技术也称深度测序、大规模平行测序,**思想是边合成边测序(SequencingbySynthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列,现有的技术平台主要有Roche/454FLX、Illumina/SolexaGenomeAnalyzer和AppliedBiosystemsSOLIDsystem。这三个技术平台各有优点,454FLX的测序片段比较长,高质量的读长能达到400bp;Solexa测序性价比**高,不*机器的售价比其他两种低,而且运行成本也低,在数据量相同的情况下,成本只有454测序的1/10;SOLID测序的准确度高,原始碱基数据的准确度大于%,而在15×覆盖率时的准确度可以达到%。Illumina/SolexaGenomeAnalyzer测序的基本原理是边合成变测序。在Sanger等测序方法的基础上,通过技术创新,用不同颜色的荧光标记四种不同的dNTP,当DNA聚合酶合成互补链时,每添加一种dNTP就会释放出不同的荧光,根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理,从而获得待测DNA的序列信息。二代测序的一般流程如下:1)文库制备,将DNA用雾化或超声波随机片段化成几百碱基或更短的小片段。安徽全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导

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