MSI和dMMR检测的临床应用
•实体瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的选择
•2017年5月23日，美国FDA批准了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）应用于高度微卫星不稳定性（MSI-H）或错配修复缺陷（dMMR）的实体liu患者
•2017年8月1日，FDA批准百时美施贵宝的Opdivo（nivolumab）可应用于***氟嘧啶，奥沙利铂和伊立替康***后疾病进展的MSI-H或dMMR的转移性结直肠liu患者
•MSI和dMMR的传统临床应用
•用于结直肠liu和子宫内膜liu患者林奇综合征（HNPCC）的筛查（98%美国临床实验室）
•用于结直肠liu患者的预后指标，MSI-H患者预后较好（美国临床实验室占48%）
•作为结直肠liu患者辅助化疗(5-FU和Irinotecan)的用药指导 迈杰转化医学开发的伴随诊断试剂盒,基因突变检测试剂盒,检测范围全。浙江推荐dMMR抗体检测试剂技术指导
具有两个或两个以上位点改变)、低频MSI(MSI-L，*有一个位点发生改变)以及微卫星稳定型(MSS，没有位点发生改变)。由于MSI-L结直肠ai在临床表现和病理改变上与MSSliu无明显差别，因此通常被归入MSSliu。约15％的结直肠ai经MSI途径发生，其中3％左右为家族遗传性(Lynch综合征)，12％为散发性。二、遗传性MSI-H结直肠ai(Lynch综合征)与散发性MSI-H结直肠ai1．Lynch综合征与散发性MSI-H结直肠ai发生机制的异同：作为经MSI途径发生的结直肠ai的典型**，Lynch综合征**初由Michigan大学病理系的Warthin博士于1913年**先发现并报道，至1966年Lynch医师明确了本病是一种常染色显性遗传的liu综合征，在迄今100年的发现和研究过程中，“ai症家族综合征(cancerfamilysyndrome)”、“Lynch综合征”、“遗传性非息肉病性结直肠ai(hereditarynon．polyposiscolorectalcancer)”等名称曾先后在不同时期被使用。随着近年来错配修复基因在本病发生中的作用逐渐明确，现在WHOliu分类将Lynch综合征这一名称用于携带有错配修复基因胚系缺陷的常染色体显性遗传性liu综合征。目前在Lynch综合征患者中发现的DNA错配修复缺陷包括三种类型：(1)错配修复基因的胚系突变。北京定制dMMR抗体检测试剂技术指导迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统，Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。
将培养的菌液转接到500mllb液体培养基混合，37℃，200rpm，培养至od＝，iptg()低温过夜诱导。400ml大离心筒，6000rpm，离心5min收集菌体，弃上清。沉淀用20-30ml10mmtris-hcl()和终浓度为，超声破碎菌体。12000rpm离心20分钟，取离心上清上样到ni-nta镍柱(qiagen)进行纯化，之后分别用含15mm咪唑、60mm咪唑、300mm咪唑的10mmtris-hcl()(含)溶液洗脱，分别收集蛋白峰，电泳检测，备用；所制备的重组蛋白，蛋白浓度为，纯度为80％。图1为纯化后重组msh6蛋白的电泳结果图,其中m：分子量标记、1：：、实施例2abm58060-20a2-pu杂交瘤细胞系的建立一、免疫将实施例1中的重组蛋白用弗氏完全佐剂(sigma公司，f5881)乳化，免疫icr小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6点，剂量为60μg/只。每14天加强免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐剂(sigma公司，f5506)乳化，剂量为30μg/只。第3次加强免疫后7天，msh6-1蛋白，2ug/ml，4℃包被过夜，elisa检测小鼠血清中抗免疫原的多抗效价，效价比较高的小鼠以尾静脉注射冲击免疫，抗原用生理盐水混匀，剂量为50μg/只。二、细胞融合：无菌制备免疫达标的小鼠脾细胞悬液，与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0。
atccnumbercrl-8287)以5:1比例混合，离心1500rpm，5min。弃上清后离心管放入37℃水浴中，在1分钟内缓慢加入1ml的peg1500(roche公司)，并搅动细胞。在温水中静置1min后，加入10ml无血清的imdm(sigma公司)，混匀，离心1000rpm，5min。弃上清后，加入10ml血清(paa公司)小心的将细胞吹打起来，并加入5ml混合10xhat(sigma公司)的胸腺细胞，混匀。再加入25ml含有％硝基纤维素(sigma公司)的半固体培养基充分混匀，然后均匀的倒入20个细胞培养皿中。将细胞培养皿放入到湿盒中，放入37℃5％co2培养箱中培养。三、克隆化及elisa筛选阳性杂交瘤细胞：融合后11天，克隆细胞团大小密度适中，在解剖镜下，吸取圆、实、大的克隆团(10板×93个)打入事先准备好培养基的96孔培养板中，放入37℃5％co2培养箱中培养。3天后，细胞量大约占底面积2/3，取100μl上清进行elisa筛选。阳性克隆完全换液，加入200μl含饲养细胞和1％ht(sigma公司)的完全培养基。两天后进行第二次elisa筛选，阳性克隆转入事先准备好培养基(含饲养细胞和ht)的24孔板培养。五天后取100μl上清进行第三次elisa筛选，阳性克隆逐次转入6孔板和细胞培养瓶扩大培养并冻存。迈杰转化医学设有病原体检测平台Qiastat-Dx进行呼吸道及胃肠道病原体检测。
4)一级亲属有结直肠ai史。(5)以下两项及以上阳性者：慢性腹泻、慢性***、黏液血便、不良生活事件史、慢性阑尾炎或阑尾切除史和慢性胆道疾病或胆囊切除史。2.伺机性筛查：也称机会性筛查或个体筛查、个案筛查，可以是受检者主动就医，也可以是医师根据受检者的危险水平决定筛查方式和策略。缺点是难以通过大规模人群的数据分析来判断能否降低地区结直肠ai的发病率。结直肠ai伺机筛查可改善患者预后、提高生命质量，同时减轻我国医疗负担，适合我国当前的医疗制度和国情。因伺机筛查入组人群存在较大偏倚，不具有代表性，依据伺机筛查得出结论的指导意义有一定局限，故在国内外未受到重视。事实上，伺机筛查人群依从性较社区人群更高，伺机筛查多在医疗中心展开，相关人员具备较高的疾病诊断与***能力，方便取得更精确的疾病相关信息。通过有效的随机分组设计和对照组匹配，也可达到较好的人群代表性，可作为我国筛查工作下一步探索和推广的重点领域。3.遗传性结直肠ai的筛查和监测：APC基因相关**肉病(包括经典家族性腺瘤**肉病、轻型家族性腺瘤**肉病、Gardner综合征和Turcot综合征等)及遗传性非息肉病性结直肠ai(Lynch综合征)的筛查对象除患者外。迈杰转化医学获得了欧盟ISO 13485质量认证并通过了国家医疗器械GMP稽查。河北提供dMMR抗体检测试剂郑重承诺
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中位PFS分别为（P=），中位OS分别为（P=）。表1：CRYSTAL研究结果提示在RAS野生型的**患者中，通过将西妥昔单抗添加到FOLFIRI方案中，ORR、PFS与OS均有***获益。而出现任一**RAS基因突变（KRAS外显子2+新RAS）患者中，给予西妥昔单抗添加到FOLFIRI方案不管在ORR，还是在PFS和OS均无获益。TRICOLORE研究比较了S-1＋CPT-11＋Bev（实验组）*****mCRC在PFS上不劣于甚至优于mFOLFOX6或CapeOX联合Bev（对照组）的Ⅲ期研究。结果显示，试验组与对照组的中位PFS分别为，，亚组分析显示，对照组和试验组WTRAS（RAS野生型）中位PFS分别为；两组MTRAS（RAS突变型）中位PFS分别为，具体见下表。表2：TRICOLORE研究结果、PRIME、PEAK研究FIRE-3研究使用西妥昔单抗+FOLFIRI对比贝伐珠单抗+FOLFIRI，PRIME研究使用帕尼单抗+FOLFOX4对比FOLFOX4，PEAK研究应用帕尼单抗+mFOLFOX6对比贝伐珠单抗+mFOLFOX6，三项研究结果均表明相较于KRAS外显子2野生型患者，扩展RAS分析后的RAS野生型患者的***疗效更好。基于RAS基因状态筛选的患者，并进行靶向用***案的制定，才能符合患者的**大利益，同时符合对靶向药物***评估的新标准。表3：FIRE-3、PRIME、PEAK研究结果二、BRAF基因RAF是RAS的下游基因。浙江推荐dMMR抗体检测试剂技术指导