胎牛血清在细胞培养中的作用:1.提供对维持细胞指数生长的Hormone,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他Hormone等,能结合或调节它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到释放毒性作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。7.参与细胞冻存。在细胞培养中,胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为5%~20%(常见为10%)的。具体到不同试验,应依据文献报导,或细胞类型或基础培养基的成分来确定较佳浓度。胎牛血清应在-20℃储存,运输应干冰冷链运输,避免反复冻融,确保血清中因子活性不受影响,保证血清优良品质。胎牛血清是品质高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分较为少。南京特级血清哪里有卖
用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法:包括以下步骤:采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆,具体步骤如下:采用含有体积含量4-6%葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2-0.6%柠檬酸钠的水溶液进行混合,将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁;将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内,摇动使其与胎牛血液均匀混合;将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采的血试管,保持血液在40℃以下恒温状态,然后将采的血试管在离心机中以3000-14000r/min转速旋转5-30分钟,分离出血浆、血小板、血球,将所得血浆、血小板、血球分别采用采的血试管分离存放;杭州细胞培养用血清哪里有热灭活反而影响胎牛血清中的活性成分。
胎牛血清:解冻胎牛血清时,请按照规定的的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若胎牛血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。解冻胎牛血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。请勿将胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清会变得混浊,同时胎牛血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响胎牛血清的质量。胎牛血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。若必须做胎牛血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。
如何区别真假胎牛血清:主要技术指标,1、内的毒性,标准为不高于5EU/ml。内的毒性是细菌破碎后细胞壁的成分,因此内的毒性含量的高低可表现出采的血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前,国产血清基本都能达到这一要求,很多进口胎牛血清内的毒性含量反而更高,只要求不高于50EU/ml,高出我国标准10倍。可见,内的毒性含量偏高不影响质量,除非含量极高,预示着已经污染。2、总蛋白含量,胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。胎牛血清的其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚。
胎牛血清要求:1、性状、外观:浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量:3.5%~5.0%(w/v)。3、血红蛋白含量:≤0.02%(w/v)。4、无菌检验:阴性。5、支原体检验:阴性。6、细菌内的毒性:≤5(EU/ml)。7、牛腹泻病毒:阴性。8、大肠杆菌噬菌体:阴性。9、支持细胞增殖:(Sp2/0-Ag14)生长曲线(接种浓度)较大增殖浓度≥2.5×106个/ml,细胞倍增时间:≤15h,克隆率:≥85%。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等。胎牛血清经自然层析、离心后收集得到去除血细胞、纤维蛋白等成分的淡黄色透明上清液体。杭州细胞培养用血清哪里有
胎牛血清应用比较普遍。南京特级血清哪里有卖
胎牛血清有必要做热灭活吗?实验证明,经过正确处理的热灭活胎牛血清,对于大多数的细胞而言都是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至可能因为高温处理影响了血清的质量,从而造成细胞生长速率的降低。经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此类沉淀物增加得更多,这常常会使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议客户,若非必须,可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省客户宝贵的时间,更确保血清的质量。南京特级血清哪里有卖
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