细胞外泌体circRNA测序

外泌体基础医学和临床应用的探索和深入研究对如何准确及高纯度提取外泌体, 并完整保存提出了更高的技术要求。外泌体可通过差速超速离心在不同离心力下沉淀样品中不同的杂质组分, 并在100 000 ×g~200 000 ×g的转速下获取较纯的外泌体。差速超速离心技术被认为是外泌体分离的“金标准”, 也是目前常用的外泌体分离和浓缩方法。该方法可通过结合0.22 μm或0.45 μm孔径滤膜进行超滤来提高产物纯度减少外泌体的聚集, 其分离效率容易受到加速度、转子类型、旋转半径、沉降路径长度以及样品黏度等多种因素影响。外泌体具有良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性，使其在药物递送方向大有潜力。细胞外泌体circRNA测序

外泌体起源于多泡体,以细胞管腔内囊泡的形式存在.细胞的胞吞形成带有外源性抗体的内体小泡,在高尔基体等细胞器的作用下形成早期核内体,早期核内体的囊膜内陷、突入形成多个小囊泡,并选择性的接受细胞内的蛋白质、核酸、脂类等成分,较终形成晚期核内体,晚期核内体与细胞膜融合,并将外泌体排出胞外。这是一个连续而又复杂的过程,从内体小泡到成熟外泌体,需要在各细胞器间传递并包装,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神经酰胺、胆固醇等。外泌体的排出跟其他胞内小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的调控,敲除细胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌体不能排出,且从高尔基体到晚期核内体的囊泡运输不受影响。湖北外泌体质谱外泌体及其携带的组分参与肝脏细胞的增殖、再生和迁移等生理过程，在肝脏疾病和肝损伤中起着重要作用。

流式细胞技术针对外泌体的表面抗原标记物进行检测，能够实现外泌体的高通量、多通道分析。但是由于外泌体的粒径小、折射率低，所以采用常规的流式细胞仪进行检测时往往需要将外泌体与beads连接以增大表面积、增强反射，操作耗时又费力。Tian等搭建了一种高灵敏度的流式细胞仪(HSFCM)，将可检测的外泌体粒径降至40nm，能够在不连接beads的情况下实现每分钟10000个外泌体的检测，并且能够结合免疫荧光的方法进行外泌体标志蛋白质的定量检测，目前该仪器已商品化。

要使外泌体在临床上得以更加广fan的应用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌体的提纯方式主要是超速离心，这种提纯方式效率较低，耗费时间长并且相对昂贵，并不适宜在临床上应用。(2)外泌体虽然具有一定的靶向性，但这种靶向性较弱，不足以解决中流的靶向zhiliao问题。通过在外泌体表面表达特异性肽的方法可以为上述问题的解决提供较为有效的途径。(3)在外泌体的载药fang式方面，现在常用的电穿孔法虽更具优势，但往往会对外泌体或药物的完整性产生影响，转染外泌体法不能保证基因类药物全部进入外泌体内而不是粘附在外泌体表面，存在着安全隐患。(4)外泌体作为细胞分泌物质，其本身可调性并不如脂质体以及聚合物基药物载体。所有真核细胞类型包括造血细胞、上皮细胞、干细胞、脂肪细胞均可在培养条件下分泌外泌体。

外泌体（Exosome）介导瘤血管的形成和转移。外泌体（Exosome）能将自身的细胞因子IL-8和VEGF释放到细胞外，作用于内皮细胞膜表面受体，导致瘤血管快速形成并较终通过发生EMT过程促进瘤的迁移。瘤细胞来源的外泌体（Exosome）中含有血管生长素、血管内皮生长因子等，这些细胞因子以不同的作用方式促进瘤血管的形成，如VEGF通过唤醒磷酸酯酶C和第二信使的形成，诱导纤维蛋白溶解酶原活化物的表达，使得基底膜降解，从而促进瘤细胞的迁移。miR-155可分泌至外泌体中介导邻近胰腺ai细胞的吉西他滨耐药，是潜在的胰腺ai化疗疗效预测因子。外泌体染色

临床前研究的证据表明干细胞释放的外泌体可作为心肌修复的潜在无细胞治理剂。细胞外泌体circRNA测序

微流控芯片是一种可兼容多种外泌体分离方法的新兴检测平台, 这些方法包括免疫亲和分离、膜过滤、纳米线捕获、声纳米过滤和确定性侧向位移分选等。微流控装置是由几十到几百微米的不同直径微通道网络组成的紧凑单元, 能够处理皮升到微升范围内的黏性介质样品; 且根据特定的功能, 微通道可以相互连接, 使用额外的特定装置来微调流体运动。微流控技术能够以极高的准确性和特异性在微尺度上重现众多实验室过程, 取代昂贵的设备, 基于微流控技术的电化学外泌体检测芯片已经受到广fan关注。细胞外泌体circRNA测序

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