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investigator双光子显微镜授权公司

来源: 发布时间:2024年07月02日

双光子显微镜在各领域研究中已有许多成功实例;生物领域:贝尔实验室的Svoboda等人研究了大脑皮层神经元细胞内钙离子动力学情形。利用双光子显微镜观察到的现象证明了钙离子的增加依赖于肌体触发的钠离子作用电势。信息领域:美国科学家Rentzepis提出了一种在现有二维光盘的基础上将数据储存扩展到三维空间。由于双光子激发具有作用精细体积小的特点,避免了层与层之间的互相干扰,较大地提高了数据储存密度。双光子显微镜已延伸到各个领域研究中,它能对样品进行三维观察,其基础双光子激发效应也具有极高的应用价值。我们可以相信,随着科技不断发展,其他技术的不断结合,双光子显微镜将得到更大的发展与更广的应用。双光子显微镜中,同样每个时刻只有焦平面上一个点的信号被探测,并且连焦平面外的荧光信号也不会有。investigator双光子显微镜授权公司

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在国家自然科学基金委国家重大科研仪器研制专项《超高时空分辨微型化双光子在体显微成像系统》的支持下,北京大学分子医学研究所、信息科学技术学院、动态成像中心、生命科学学院、工学院联合中国人民医学科学院组成跨学科团队,历经三年多的协同奋战,成功研制新一代高速分辨微型化双光子荧光显微镜,并获取了小鼠在自由行为过程中大脑神经元和神经突触活动清晰、稳定的图像。原始论文于5月29日在线发表于自然杂志子刊NatureMethods(IF25.3),并已申请多项。美国bruker双光子显微镜价格双光子显微镜是新型的荧光显微镜,其原理大致是这样的;

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随着技术的发展,双光子显微镜的性能不断优化。结合其特点,大致可以分为两个方面:深入和主动改进。为了使激发激光进入更深的层次,可以从器件优化和标本改造两个方面入手。关于器件的优化,我们可以把激光束做得更细,集中能量,让激光穿透得更深。对于样品,物质的吸收和散射是影响光传播的主要因素。为了解决这个问题,我们需要将样本透明化。一种方法是用某种物质浸泡标本,使其中的物质(主要是脂质)被破坏或溶解。另一种方法是通过电泳电解脂类,从而提高标本的“透明度”。

通过对显微光学系统的重新设计,将FHIRM-TPM2.0的成像视场扩展至420×420平方微米,显微物镜的工作距离扩展至1mm,实现无创成像。嵌入可拆卸的快速轴向扫描模块,实现深度180微米的三维体成像和多平面快速切换的实时成像。该模块由一个快速电动变焦镜头和一对中继镜头组成,在不同深度成像时保持放大率恒定。其中,变焦模块重1.8克,科研人员可以根据实验要求自由拆卸。此外,新型微型成像探头可以瞬间插拔,极大简化了实验操作,避免了长时间实验对动物的干扰。反复装卸探针追踪同批神经元时,视场旋转角度小于0.07弧度,边界偏差小于35微米。双光子显微镜的性能得到不断地优化,结合它的特点,大致可以分成深和活两个方面的提升。

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系统示意图如图1所示,红外激光束从蓝宝石激光器出射后,由一个光学参量振荡器(OPO)转化到可见光波段,产生的可见光脉冲宽度为200fs,重复频率80MHz,波长在490-750nm范围内可调谐。光束通过透镜及平面镜中继到包含微透镜阵列盘和阵列盘的共聚焦扫描单元中,形成用于荧光激发的多焦点光束。多焦点光束通过一个硅油浸润的物镜成像到样品上,激发荧光信号。荧光信号由同一个物镜收集并传输到阵列圆盘,产生共焦效应,隔离来自焦平面外的杂散光。双光子显微镜使用方法是什么?国内ultimainvestigator双光子显微镜代理商

双光子显微镜结合了双光子激发技术和激光扫描共聚显微镜。investigator双光子显微镜授权公司

首先,双光子成像采用波长范围约在700~1000 nm的近红外光激发,在组织中的散射系数较小,穿透性很好,因此非常适合厚样本的观察。同时,由于是近红外光激发,也能避免样品中激发波长较短的自发荧光物质的干扰,可获得较强的荧光信号(如下图)。所以双光子成像具有较深的穿透力和较小的光毒性。通常在活物脑组织中双光子显微镜有效成像深度可达200~500 μm,能够较好地进行三维成像。双光子成像的另一大优势在于精确的空间点聚焦性。一般条件下,物质只会被单光子激发,只有在光子密度足够高的情况下,物质才会吸收两个光子从而被激发,所以,双光子只会在光子密度蕞高的物镜焦点附近发生,很少产生焦平面外的杂散光(如下图)。这种性质既提高了成像质量,也降低了样本的光漂白、光损伤区域。基于这些优势,使得双光子显微镜非常适合对活细胞、活组织进行长时间在体成像。investigator双光子显微镜授权公司