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RNA二代测序分析上哪找

来源: 发布时间:2023年12月26日

二代测序可以用于对病毒的全基因组进行测序有哪些挑战?二代测序相较sanger测序,差异主要就是单次运行可以获得海量的数据量,因此也称为高通量测序。想要通过高通量测序获得病毒全序列,需要经历:核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这三大基本流程。而高通量测序技术本身并不是以病毒为目标开发的,因此每个环节都是挑战。核酸纯化步骤决定了Input核酸的起始浓度和总量,从而决定了文库构建的成败、质量和产量;文库的好坏决定了数据的质量和产出;而数据的质量产出直接影响分析结果。样品一般核酸浓度很低,且带有大量宿主污染,因此实验部分和分析部分都比较困难。探普生物基于这些困难点,进行了大量有针对性的研发和测试,开发了全套的实验和分析流程用于对病毒的全基因组进行测序,该流程自运行以来广受研究者们好评。


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高通量测序在病毒准种研究中如何应用 在采用高通量测序技术研究准种耐药性方面,人类免疫缺陷病毒(HIV)较为突出。人类免疫缺陷病毒的逆转录酶有非常大的错配倾向,造成几乎每复制1轮出现1个碱基对替换突变。被侵染的个体中存在非常巨大的病毒群,每天有1010个病毒粒子产生和死亡,在侵染后这种行为导致病毒快速形成一个多样性的群,即准种。高通量测序是研究大群体中序列突变体特征的先进方法,它的一种应用是对个体抗病毒治疗失败时产生的数量很少的耐药突变的定量研究。重庆高通量测序分析要多久想要通过高通量测序获得病毒全序列,需要经历:核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这三大基本流程。

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能实现对病毒的全基因组进行测序的技术手段:早期在高通量测序技术普及之前,对病毒的全基因组进行测序是通过非特异性扩增+克隆结合sanger测序来完成的。当物种有了参考的序列之后,可以通过特异性扩增+sanger测序获得全基因组序列。Sanger测序准确度高,读长很长,但与此同时,扩增和克隆工作费时费力,由于流程繁琐,加上快速变异导致引物无法通用,该方法对于大量基因组的测序工作而言,可操作性不强,这对于研究者一直是一个困扰。高通量测序技术正式启用之后,研究者可以将样品处理至标准浓度和体积后进行测序和分析,减少了工作量,增加了成功率。探普生物进行了大量有针对性的研发和测试,开发了全套的实验和分析流程用于对病毒的全基因组进行测序,该流程自运行以来广受研究者们好评。




二代测序应用的患者类型的推荐:共识明确指出了二代测序应用的患者类型及使用的时机的意见:对于神经系统急性传染/血流传染/呼吸道传染患者,3天是二代测序使用的时机,在传统方法(常规的生化检查和培养)3天未报阳性且经验性调整无效时,强烈推荐二代测序检测;对疑似病毒传染患者,包括:疑似神经系统病毒传染和病毒性肺炎且病情持续进展的患者,若完善传统PCR检测后依然未获得明确的病原学证据时,强烈推荐二代测序检测。对于疑似局灶性传染患者完成常规的生物化学、培养或PCR检测后,若未能获取病原学诊断结果,推荐将二代测序作为检测方法。而对于怀疑继发性血流传染患者:在原发传染灶的病原学检测为阴性或因各种因素无法送检合适标本的情况下,可考虑将血标本的二代测序检测作为二线检测。


高通量测序技术本身并不是以病毒为目标开发的。

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高通量测序技术又称“下一代“测序技术或深度测序技术,可以一次性对几十万至几百万条DNA分子进行序列测定。现已普遍应用在基因组测序、基因表达分析、非编码小分子RNA鉴定、转录因子靶基因筛选及DNA甲基化等相关的研究领域。高通量测序技术是对传统测序一次性的改变,一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术(nextgenerationsequencing)足见其划时代的改变,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深度测序(deepsequencing)。


病毒全基因组测序具有的特点:独有的一定定量技术,实现病原定量分析。DNA深度测序上哪找

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病毒基因组的结构特点有哪些? 病毒基因组大小相差较大。 病毒基因组可以由DNA组成,也可以由RNA组成。 多数RNA病毒的基因组是由连续的核糖核酸链组成,还没有发现有节段性的DNA分子构成的病毒基因组。 病毒基因组的大部分是用来编码蛋白质的。 病毒基因组DNA序列能上相关的蛋白质的基因或rRNA的基因往往丛集在基因组的一个或几个特定的部位,形成一个功能单位或转录单元。 除了反转录病毒以外一切病毒基因组都是单倍体,每个基因在病毒颗粒中只出现一次。 噬菌体(细菌病毒)的基因是连续的;而真核细胞病毒的基因是不连续的,具有内含子。RNA二代测序分析上哪找