石家庄鼠尾胶原

鼠尾胶原实验应用：鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性，免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法，并且制作简便,成本低廉。鼠尾胶原醋酸溶解：制备成浓度为0.1%的溶液。石家庄鼠尾胶原

I型鼠尾胶原是借鉴NavneetaRajan,JasonHabermehl法，经过乙酸抽提、离心、灭菌、透析等步骤制备得到的高纯度、高活性胶原蛋白，属于医药级别产品，可用于包被细胞培养器皿（单分子层包被），适合多种类型细胞的贴壁如肝脏细胞、神经节细胞、胚胎细胞、肌细胞、肺细胞、神经鞘细胞等。I型胶原蛋白包被细胞培养板，规格为6/24孔板，表面经I型胶原蛋白包被，可以很好的降低蛋白质的吸附。使用这种细胞培养板培养细胞，可以获得良好的细胞贴壁率，细胞增殖速度快，形态均一，细胞培养成功率高。郑州鼠尾胶原直销价鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对体外培养角膜上皮细胞增殖的影响。

胶原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解，水解条件温和，反应速率快，提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构，蛋白纯度高，理化性质稳定，且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法，即利用酶液直接提取；二步法，即先用酸或者碱进行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑，然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白，探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响，给出了酶对胶原提取较佳工艺配比，酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳，而使用无花果蛋白酶时，0.01的配比较佳。

鼠尾胶原包被培养板：胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24-48h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。结果与结论:①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。它是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型。

鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解：1．将胶原加入到0.1M的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3．稀释一定数量的胶原溶液。4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。整个操作请于冰上进行，因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。北京鼠尾胶原

酸法提取主要采用低离子浓度酸性条件浸渍处理原料，从而破坏分子间的盐键和希夫碱。石家庄鼠尾胶原

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明：不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。石家庄鼠尾胶原

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