外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于细胞培养上清液、血清、血浆、尿液及其他体液(脑脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌体提取,并搭配纯化过滤装置,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒。注意事项:1.对于待测样品粘度过大时,可将样本用4℃预冷的1×PBS缓冲液进行等体积稀释处理。2.当血清、血浆、唾液等样品收获的外泌体浓度较高,收获的外泌体颗粒无法通过EPF柱纯化时,可用4℃预冷的1×PBS进行稀释后再通过EPF柱离心。3.针对外泌体标志蛋白(CD63,CD9,CD81等)进行Westernblot检测,可以鉴定所提的外泌体。通过超速离心(120000g/分钟)20小时以上才能获得足够的外泌体量。外泌体的提取分离:超滤离心。长沙外泌体提取试剂平均价格
外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡,直径约为30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯状形态、双层膜结构,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括瘤细胞在内几乎所有类型的细胞(免疫细胞、神经细胞、干细胞),都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA,Exosome可通过细胞膜受体直接受体细胞,也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至细胞器进入受体细胞,参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作用,不同细胞来源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不尽相同,可作为多种疾病的早期诊断标记物,也能作为靶向药物的载体进行疾病开封外泌体提取试剂厂家直销外泌体在免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。
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人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。外泌体:形成了一种全新的细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。
将浓缩液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速离心100000×g(水平转子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的颜色明显较深条带的液体约5mL,以10倍PBS稀释混匀后再次用100-ku超滤离心管(Millipore)浓缩至5mL,将浓缩液重新以10倍PBS稀释后4℃超速离心100000×g(角转子TYPE50.2)4h,收集离心管底部约1mL液体及极微量沉淀(来自2×107个细胞)以20mLPBS重悬即为胞外体,用0.22μm过滤膜除菌后冻存于-80℃备用。(该步骤参考文献“肿瘤细胞来源胞外体的分离鉴定与功能检测”)优点是:分离得到的外泌体纯度很高。缺点是:步骤繁琐、耗时耗力、对离心时不好把握。外泌体提取:具有高粘度的生物样品。天津外泌体提取试剂厂家供应
超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。长沙外泌体提取试剂平均价格
外泌体项目获批学科方向:从统计来看,与前年相似外泌体立项集中的领域还是一些病症学,近年来外泌体发表的文章也绝大部分与其在一些病症的形成,耐药性,检测等方面有关。例如2019年发表在MolecularCancer(IF=10.679)上的文章表明外泌体FMR1-AS1通过TLR7/NFκB/c-My信号通路在女性食管ai中促进维持ai症干细胞样细胞的动态平衡。发表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch(IF=5.646)上的一篇文章发现外泌体转运p-STAT3可促进结直肠ai细胞获得性5-FU耐药性。发表在Cancers(IF=6.162)上的一篇文章则研究了腹腔灌洗液中细胞外囊泡相关的miRNA作为子宫内膜ai分子标志物的可能性。此外,在神经系统和精神疾病,中医学及其他领域也有不少外泌体相关项目中标。长沙外泌体提取试剂平均价格