多克隆抗体免疫动物:抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于调理,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。抗体检测可以用于检测病原体传染、免疫状态和疫苗效果等。江苏Prestige抗体公司排行
抗体水解片段:在一定条件下,Ig分子肽链的某些部分易被蛋白酶水解为不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的两种Ig蛋白水解酶,并可籍此研究Ig的结构和功能,分离和纯化特定的12多肽片段。抗体的功能与其结构密切相关。同一抗体的V区和C区的氨基酸组成和顺序的不同,决定了其功能上的差异。不同抗体的V区和C区在结构变化上具有一定的规律,又使得其在功能上存在共性。V区和C区的组成和结构,决定了抗体的生物学功能。江苏Prestige抗体公司排行单克隆抗体是由单一源头的B细胞产生的抗体,具有高度特异性。
多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应,制备时间短,成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。可以作为抗原的物质有很多种,一般的科研实验中,经常使用的抗原有:偶联多肽、偶联的小分子或化合物、天然或重组蛋白等等。对可溶性抗原而言,为了增强其免疫原性或改变免疫反应的类型、节约抗原等目的,常采用加佐剂的方法以刺激机体产生较强的免疫应答。
多克隆抗体免疫动物:供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类,常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体,多采用大动物;如要是获得直接标记诊断的抗体,则直接采用本动物;如要获得间接的标记诊断用抗体,则必须用异源动物制备抗体;如果难以获得的抗原,且抗体的需要量少,则可以采用纯系小鼠制备;一般实验室采用的抗体,多用兔和羊制备。免疫用的动物建议选择适龄的健康雄性动物,雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适,有时甚至不产生抗体。特异性抗体可以针对不同的病原体或细胞表面分子,提供精确的免疫保护。
多克隆抗体抗血清冻存:抗血清收获后,加 1/万硫柳汞或 1/万的叠氮钠防腐,或加入等量的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下的低温保存,数月至数年内抗体效价无明显变化。注意避免反复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:1、制备抗原。2、选择实验动物。3、动物免疫。4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。6、纯化出抗体。7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。具体操作与制备原理参见中国免疫学实验网。抗体还可以通过启动补体系统引发炎症反应,吸引其他免疫细胞前来去除病原体。上海IgG抗体公司排行
抗体也可以通过血液透析、免疫球蛋白输注等方式进行passively transfer。江苏Prestige抗体公司排行
抗体特性和功能:IgD正常人血清lgD浓度很低,仪占血清Ig总量的0.2%。IgD可在个体发育的任何时间产生。5类lg中,IgD的铰链区很长,易被蛋白酶水解,故其半衰期很短(只3天)。lgD分为两型:血清型IgD的生物学功能尚不清楚;膜结合型IgD(mlgD)构成BCR,是B细胞分化发育成熟的标志,未成熟B细胞只表达mlgM,成熟B细胞可同时表达mlgM和mIgD,称为初始B细胞(naive B cell)。活化的B细胞或记忆性B细胞表面的mlgD会逐渐消失。IgE是正常人血清中含量很少的Ig,血清浓度极低,约为5×10-5mg/ml。江苏Prestige抗体公司排行