IgE是什么?与过敏有什么关系?说IgE之前,我们先来了解一下抗体,它的本质是蛋白质,确切地说,它是一种具有免疫功能的球蛋白,存在于血清、体液、外分泌液和一些细胞膜上,因此也叫做免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)。人体至少有5种免疫球蛋白,各自具有不同的免疫学功能,包括IgM,IgG,IgA,IgD和IgE。其中与过敏关系密切的是IgE抗体。IgE是Ⅰ型超敏反应机制中重要的免疫分子,自1967年IgE纯化以来,血清学检测已成为诊断超敏反应疾病常用的检测方法。单克隆抗体的研究有助于了解免疫系统的功能。河南IgG抗体基因
抗体水解片段:在一定条件下,Ig分子肽链的某些部分易被蛋白酶水解为不同片段。木瓜蛋白酶(papain)和胃蛋白酶(pepsin)是很常用的两种Ig蛋白水解酶,并可籍此研究Ig的结构和功能,分离和纯化特定的12多肽片段。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在铰链区二硫键连接的两条重链的近N端,可将Ig裂解为两个完全相同的Fab段和一个Fc段。Fab段即抗原结合片段(fragment antigenbinding,Fab),由一条完整的轻链与重链的VH和CHl结构域组成。一个Fab片段为单价,可与抗原结合但不产生凝集反应或沉淀反应;Fc段即可结晶片段(fragment crystallizable,Fc),由Ig的CH2和CH3结构域组成。Fc段无抗原结合活性,是Ig与效应分子或细胞相互作用的部位。IgD抗体单克隆抗体的制备方法包括杂交瘤技术和免疫原法。
单克隆抗体(monoclonal antibody,Mab)技术是20世纪免疫学技术的一项里程碑式突破。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合生成杂交瘤细胞,这种杂交瘤细胞核内含有双亲细胞的染色体,继承了亲代细胞的特征。它既具有瘤细胞在体外培养中迅速增殖的能力,又具备免疫脾细胞合成和分泌特异性抗体的特性。随后用适当方法把杂交瘤细胞分离出来,进行单个细胞培养,使之大量繁殖,在培养液中形成单个杂交瘤细胞的克隆(也称细胞系)。由于每个B淋巴细胞只有合成一种抗体的遗传基因,所以单个杂交腐细胞的克隆也只能产生一种专一性抗体,即单克隆抗体。这种制备产生单克隆抗体的技术被称为单克隆抗体技术;
单克隆抗体技术在临床应用中为疾病的诊断、调理提供了新手段,作为调理用药物,单克隆抗体主要应用于tumour、自身免疫疾病、部位移植排斥及病毒传染等领域。单克隆抗体也可用于tumour的导向调理,将针对某一tumour抗原的单克隆抗体与化疗或放疗药物连接,利用单克隆抗体的专一性识别结合特点,将药物携带至靶细胞并直接将其杀伤。由于单克隆抗体具有特异性强、纯度高、均一性好等优点,极大促进了单克隆抗体检测试剂盒的发展,在病原微生物、免疫细胞及细胞因子的检测诊断中广泛应用。若将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内后可进行放射免疫显像,协助tumour的诊断。在亲和色谱中单克隆抗体是重要的配体,若将单克隆抗体固定到一个惰性的固相基质上,则可用于特异性抗原分子的高度纯化。多克隆抗体的制备过程相对复杂,需要较长时间和资源。
抗体结构域:轻链有VL和CL两个结构域;IgG、IgA和IgD的重链有VH、CH1、CH2和CH3四个结构域;IgM和IgE的重链有五个结构域,即多一个CH4结构域。每个结构域由约110个氨基酸组成,氨基酸序列具有相似性,其二级结构是由几条多肽链折叠形成的两个反向平行的β片层(anti-parallel β sheet)构成的,两个β片层中心的两个半胱氨酸残基由一个链内二硫键垂直连接,形成一个“β桶状(βbarrel)”或“β-三明治 (β sandwich)”结构,这种折式称为免疫球蛋白折叠(immunoglobulin folding)。许多膜型和分泌型的蛋白质分子也含有这类独特折叠的二级结构,因此,这类分子被统称为免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily,IgSF)。多克隆抗体的制备过程可以在实验室中完成,并且通常具有较高成功率。苏州自身抗体生产厂家
多克隆抗体的希望主要集中于富集特定细胞亚群,开发更多临床应用。河南IgG抗体基因
免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫部位,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。河南IgG抗体基因