多克隆抗体免疫动物:抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不同而不同。剂量过低,不能引起足够强的免疫刺激,免疫剂量过多,有可能引起免疫耐受。在一定的范围内,抗体的效价是随注射剂量的增加而增高。蛋白质抗原的免疫剂量比多糖类抗原宽。一般而言,小鼠的初次免疫剂量为 50μg~400μg/次, 大鼠为100μg~1 000μg/次, 兔为 200μg~1 000μg/2次。加强剂量为初次剂量的 1/5~2/5。免疫剂量与注射途径有关,一般而言,静脉注射剂量大于皮下注射,而皮下注射又比掌内和跖内皮下注射剂量大,也可采用淋巴结内注射法。多克隆抗体可以通过亲和层析或凝集素亲和纯化方法进行纯化,以获得较高纯度的抗体。杭州专业抗体补给公司
19世纪后期,Von Behring及其同事Kitasato研究发现,用白喉或破伤风免疫动物后可产生具有中和有害素作用的物质,称之为antitoxin,随后引入“抗体”一词来泛指抗有害素类物质。抗体(antibody,Ab)是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白,主要存在于血清等体液中,是介导体液免疫的重要效应分子,能与相应抗原特异性结合,发挥免疫功能。1937年,Tiselius和Kabat用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分,并发现抗体主要存在于γ区,因此抗体又被称为γ球蛋白。杭州专业抗体补给公司抗体按其反应形式分为凝集素、沉降素、抗毒、溶解素、调理素、中和抗体、补体结合抗体等。
多克隆抗体免疫动物:抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于调理,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现,极大提高了抗体的生产量。抗体通过与细菌或病毒表面的抗原结合来阻止它们进一步侵袭机体。
抗体特性和功能:IgG于出生后3个月开始合成,3~5岁接近成人水平。IgG是血清和体液中含量很高的抗体,占血清总Ig的75%~80%。人lgG有4个亚类,根据其在血清中浓度的高低排序,分别为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。IgG的半衰期为20~23天,是再次免疫应答产生的主要抗体,其亲和力高,在体内分布普遍,具有重要的免疫效应,是机体抗传染的“主力军”。IgG1、IgG2和IgG3可以穿过胎盘屏障,在新生儿抗传染免疫中起重要作用。IgG1、lgG2和IgG3能通过经典途径活化补体,并可与巨噬细胞、NK细胞表面Fc受体结合,发挥调理作用、ADCC作用等;人IgGl、IgG2和IgG4可通过其Fc段与葡萄球菌蛋白A(SPA)结合,借此可纯化抗体,并用于免疫诊断。某些自身抗体如抗甲状腺球蛋白抗体、抗核抗体,以及引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反应的抗体也属于IgG;特异性抗体可以针对不同的病原体或细胞表面分子,提供精确的免疫保护。苏州IgD抗体价格
抗体的中和作用是通过阻止病原体与宿主细胞结合而抑制传染的扩散。杭州专业抗体补给公司
IgE抗体是人体内非常重要的一类免疫球蛋白,在正常情况下,其含量是所有免疫球蛋白中很低的一种。但在病理情况下,如过敏性疾病,或寄生虫传染时,IgE水平可明显升高。在过敏性疾病时,IgE可与致敏原结合,进而再与肥大细胞,或嗜碱性粒细胞表面相应的受体结合,即可引起上述细胞脱颗粒,释放白三烯和组胺类的物质,从而引起临床上过敏反应。在寄生虫传染时,IgE可与抗原结合,进而再与嗜酸性粒细胞表面相应的受体结合。嗜酸性粒细胞活化后,通过ADCC的作用,可对寄生虫进行吞噬。除外,还有病理情况,如浆细胞瘤,即血液科较常见的多发性骨髓瘤,可出现IgE水平的升高,这时应完善血尿、免疫固定电泳,判断患者是否存在单克隆增生的免疫球蛋白,除外患者是否有血液系统的疾病。杭州专业抗体补给公司