FLIM荧光寿命相机的临床应用

（文献部分内容摘抄）

从眼部疾病的显微镜到神经外科的成像，再到皮肤和脑患者的断层扫描，荧光终生成像显微镜是多功能的伙伴，可以与许多其他成像技术相结合，产生惊人的结果。

荧光寿命成像显微镜(FLIM)是在20世纪80年代后期随着脉冲激光的发展而出现的，但直到20世纪90年代，由于引入了双光子飞秒激光扫描显微镜，FLIM才得到广泛应用。

术语 FLIM 的定义是荧光寿命成像[显微镜]，用空间分辨率描绘荧光寿命。FLIM图像通常是用显微镜和纳米镜、内窥镜和断层摄影仪，但也可以在宏观水平上获得。

FLIM图像通常是假彩色编码的颜色反映值。FLIM图像可以在频率模式用连续或脉冲激光测量相移和解调)下拍摄，也可以在时间模式下使用时间门限相机、条纹相机和与时间有关的单光子计数(TCSPC)单元。

事实上，基于TCSPC的 FLIM 目前被用于探索相当有挑战性和令人兴奋的应用之一:患者的体内临床成像。在这种方法中，一光子激励来自可见光谱范围内的皮秒激光二极管，而二光子激励则来自近红外飞秒激光的应用。

由于关注的是测量荧光分子的荧光寿命(荧光分子处于激发态的时间)，而不是其强度，因此FLIM于所有困扰传统荧光显微镜技术的因素。“它于实验参数，例如照明强度、光路长度、检测效率、散射和光漂白，”显微镜有限公司的产品经理说，德国人。“因此,它能够在不同分子环境下的同一荧光物种的不同部分之间，或在发射光谱相同或重叠强烈的荧光物种类之间提供对比。除了于内部仪器设置(如激光强度或检测效率)之外，FLIME还允许使用多种类型的荧光标记同时评估不同的过程。在数据分析方面，利用荧光寿命保护技术可以很容易地去除组织自发荧光产生的任何背景辐射。

FLIM显微镜、断层扫描仪和内窥镜仍然昂贵且相对笨重，限制了它们在专业市场的应用。但随着超紧凑、低成本的飞秒激光源在未来几年的可用性，预测FLIM工具将变得越来越可用，临床应用将开始出现。虽然医学 FLIM 仍被认为是早期阶段但图像分辨率已得到发展。

将 FLIM 的光谱范围扩展到深紫外线也非常有趣，因为许多生物分子具有天然存在的发色基团，如酪氨酸或色氨酸。“通过使用紫外激光和足够的光学元件，人们可以利用这种天然荧光，减少用染料标记此类分子的需要，奥萨斯-穆勒说。“相对于强度随着老化，FLIM使[用户]能够根据其不同贡献来区分紫外光谱范围内的(自动)荧光。

随着结构的进一步改进，随着技术方法和荧光标记(包括新型荧光蛋白)的进步，未来FLIM的细胞生物学必将有新的突破。

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