MYH10招募去泛素化酶USP45促进卵巢AI顺铂耐药

正文

Highlights如下：

1）MYH10在SOC中表达上调。MYH10与总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)负相关。

2）MYH10通过EMT信号调控SOC细胞增殖、迁移、侵袭、转移和顺铂耐药。

3）机制上，结合生信预测和CoIP实验表明MYH10与MYH9结合，招募去泛素化酶USP45，促进SNAIL蛋白的去泛素化化，抑制SNAIL降解，促进SOC AI发生、发展和顺铂耐药。

临床相关性：

MYH10在SOC中表达上调、与MYH9的表达呈正相关。MYH10与OS和RFS负相关。MYH10+/MYH9+共表达是预测SOC患者生存的预后因素。

功能研究：

MYH10敲减抑制SOC细胞的增殖、转移和顺铂耐药，动物实验结果显示，MYH10敲减抑制AI生长和肺转移。此外，MYH10敲减抑制EMT标志物水平。

机制研究：

为了明确MYH10在SOC细胞中的作用机制，利用Biogrid分析发现SNAIL是MYH10的候选作用蛋白。检测发现MYH10敲减只下调SNAIL的蛋白水平（图1a-b）。Co-IP实验发现MYH10与SNAIL互作（图1c）。MYH10是否通过抑制SNAIL的泛素化减少其降解呢？使用anti-SNAIL进行IP实验，使用anti-UBC进行WB检测，结果发现MYH10降低SNAIL的泛素化水平（图1d）。并且MYH10敲低能减少CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图1e）。表明MYH10与SNAIL互作，影响SNAIL蛋白的稳定性。

图1 MYH10去泛素化SNAIL蛋白（Ref. Fig2/3）

此外，Biogrid分析还发现MYH9是MYH10的候选互作蛋白。早期研究已证实MYH9通过调节Wnt/β-catenin通路和EMT信号促进SOC的增殖和转移。外源和内源Co‐IP实验显示MYH10功能域与MYH9互作（图2a-d）。GST pull-down分析也表明MYH10可与MYH9直接结合（图2b）。临床样本分析发现MYH10和MYH9水平正相关，MYH10+/MYH9+共表达是一个预后因素（图2e）。结果表明MYH10与MYH9直接结合。

图2 在SOC细胞中MYH10与MYH9结合（Ref. Fig4）

MYH9在OC中的功能早前已报导，因此进一步探究MYH9对SNAIL的影响。检测发现敲低MYH9同样只下调SNAIL的蛋白水平（图3a-b）。为了进一步验证MYH9的作用机制，用Biogrid分析候选互作蛋白，发现USP45和SNAIL是MYH9的候选互作蛋白。内源Co‐IP实验分析表明MYH9可分别与USP45、SNAIL和泛素互作，Co-IP实验还发现USP45敲低可改善MYH9对SNAIL的去泛素化和稳定性的影响（图3c-d）。同样MYH9也能改变CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图3e）。表明MYH9与USP45、SNAIL和泛素互作，并通过USP45影响SNAIL蛋白的稳定性。

进一步的功能回复实验结果，敲低MYH9可逆转MYH10对SOC AI变、进展和顺铂耐药的促进作用（图3f-g），而敲低SNAIL蛋白可逆转MYH9对SOC AI变、进展和顺铂耐药的促进作用（图3h-i）。进一步验证了MYH10、MYH9和SNAIL之间的关系。

结论：本研究发现MYH10在SOC中表达上调，与OS和RFS负相关。MYH10+/MYH9+共表达是预测SOC患者生存的预后因素。体内外功能上， MYH10敲减抑制SOC细胞的增殖、转移和顺铂耐药，抑制EMT标志物水平。机制上，结合数据库预测和内外源Co-IP实验以及功能回复实验表明MYH10与MYH9结合，招募去泛素化酶USP45去泛素化SNAIL，抑制SNAIL降解，促进SOC AI发生、发展和顺铂耐药。而大量的临床样本检测分析提示MYH10可能是一个新的预测SOC预后的生物标志物。