伊文思蓝染色液(0.5%)

稳定转染细胞的筛选：1、转染48 h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤效果较好。但细胞过于稠密，其效率会降低，较好将细胞稀释至丰度低于25%。2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间（取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果）。4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5、后续更换正常培养基培养即可。PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为溶剂。伊文思蓝染色液(0.5%)

单个核细胞分离液：反复着床失败(recurrent implantation failure, RIF)已成为阻碍妊娠率进一步提高的瓶颈问题。PBMCs (peripheral blood mononuclear cells)是指外周血单个核细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核细胞等,研究发现皮下注射丈夫或第三者外周血淋巴细胞主动免疫治好能提高IVF-ET反复着床失败患者的妊娠率和活产率。在着床前宫腔灌注自体单个核细胞（PBMCs）（部分文献写为单核细胞）联合HCG用于反复着床障碍的患者其具有操作简单、一次完成、安全简便、无反应等优点。对于反复着床失败患者在胚胎移植前给予宫腔灌注HCG处理过的PBMCs免疫治好能明显提高患者的胚胎着床率和妊娠率。伊文思蓝染色液(0.5%)一般盐雾标准中要求试验过程中的盐雾收集液pH值在6.5~7.2之间。

检测试剂盒以免疫学反应为根底，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化效果相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。因为抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每参与一种试剂孵育后，可通过洗刷除掉剩余的游离反应物，然后保证试验结果的特异性与稳定性。使用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次参与，再与HRP符号的抗体结合，构成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗刷后加底物TMB显色。检测试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的效果下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过规范曲线核算样品的浓度。

利福平助溶剂：性状：白色或类白色粉末，无刺激气味，易溶于水。主要成分：医药级药物赋形剂。成分特性：赋形剂性质稳定，与主药无配伍禁忌，不产生副作用，不影响疗效，在常温下不易变形、干裂、霉变、结块、对人体无害、无生理作用，不与主药产生拮抗作用，不影响主药的含量测定等。作用机理：浅化学机理助溶，根据药物分子结构贴合相应的亲水基团，从而达到助溶目的。使用方法：利福平与助溶剂按7：3比例添加混合均匀，即得70%水溶利福平，混合后粉碎一遍效果更佳。(如需加工10-30%水溶利福平，用加工好的70%水溶剂福平加兽药辅料稀释即可。)标准：企业标准，混合后水溶利福平基本无白点，加入水中，溶解迅速至澄清， 溶解度4000PPM以上， 溶液中性弱碱， PH值7左右。注意事项：加工成水溶性原料后，应在干燥密封处保存，避免氧化!!!检测试剂盒吸入液体时的的方法是吸两档打一档。

方便快捷的LSMTM淋巴细胞分离液：早期分离白细胞的方法，会用一种化合物混合血液。此化合物能够聚集红细胞，只轻微影响白细胞。通过离心，红细胞由于密度增加而聚集沉淀，同时从离心管内上层收集白细胞。后来，Böyum提出的以Ficoll®-甲泛影钠溶液为介质进行离心。稀释的血液在Ficoll®-甲泛影钠溶液中分层，之后低速短时离心。红细胞和多形核粒细胞沉降到管底，单个淋巴细胞、单核细胞和血小板可以从两个分层间的分界面处收集。而MP Biomedicals出品的淋巴细胞分离液，不同于Böyum的配方，由于LSM中含有聚蔗糖和泛影酸盐，能够形成特定的密度梯度1.077 g/mL（20℃）。只需要将血液样品轻置于淋巴细胞分离液上层，经过简单的一步离心(400 xg，30分钟)，就能够分离获得淋巴细胞。检测试剂盒可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。维生素B2检测试剂盒(荧光光度法)

用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。伊文思蓝染色液(0.5%)

筛选：筛选之前:由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的适合筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定细胞对这一批G418的适合筛选浓度。尽管如此，特性明确的细胞系G418的适合用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的适合用量。伊文思蓝染色液(0.5%)

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