溶出介质(EP

当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用，称为缓冲作用，这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液(如HOAc与NaOAc)，弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用，是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时，H+离子基本上被A-离子消耗:所以溶液的pH值几乎不变;当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。利福平溶液怎么配制：过滤灭菌后，小份分装（1-2ml每管）后，置于－20℃保存。溶出介质(EP,pH1.9)

杀灭曲线的建立：通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线），确定能够杀死未转染宿主细胞的较低浓度，从而筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。建立杀灭曲线至少选择5个浓度。1、按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上，37℃，CO2过夜培养（需要更高密度，可增加接种量）。2、根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。3、第2天换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基，每个浓度做三个平行孔。4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。5、按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。通常7-10天内能够杀死绝大多数细胞的较低浓度为筛选用的工作浓度。改良台氏液杀灭曲线的建立：根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应，在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上，吸光度上升的反应，其试剂空白吸光度越低越好，不能超过一个高限;相反，吸光度下降的反应，其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此，试剂空白吸光度限值，常作为程序参数输入仪器，如经核查超限，仪器会自动报警，提示更换试剂。

检测试剂盒冷冻后的质量会受损吗？检测试剂盒可以冷冻，但不能反复冻融，如果您在一周之内做实验，可以2-8℃保存。如果在一周至一个月之内做实验，可以-20℃保存。如果在一个月以上做实验，可以-80℃保存。但是值得注意的是，冻融一次比2-8℃保存损失更大，主要是因为蛋白的降解，冻融一次蛋白都有降解。检测试剂盒实验标本要求:标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。实验室分装时，固体只标明试剂名称，液体还须注名明浓度。

怎样减少检测试剂盒误差？检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进。洗涤彻底，如若洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。检测试剂盒操作注意事项：实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。TBS缓冲液(0.02mol/L,pH8.2)

科研实验中试剂取用应注意事项：余下部分用胶头滴管滴加药液至所需刻度线。溶出介质(EP,pH1.9)

液体固体试剂正确取用试剂的方法过程：如需少量液体试剂则可用滴管取用，取用时应注意不要将滴管碰到或插入接收容器的壁上或里面。为了达到准确的实验结果，取用试剂时应遵守以下规则，以保证试剂不受污染和不变质：试剂不能与手接触。要用洁净的药勺，量筒或滴管取用试剂，不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后，应将工具洗净（药勺要擦干）后，方可取用另一种试剂。试剂取用后一定要将瓶塞盖紧，不可放错瓶盖和滴管，绝不允许张冠李戴，用完后将瓶放回原处。已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内。溶出介质(EP,pH1.9)