具体实验流程：注：该操作流程通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性，不适用于对细菌荧光素酶进行检测。1．实验***天，消化并接种细胞（根据具体实验选择合适的细胞）于35mm细胞培养皿，置于5％CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。2．等细胞密度达到70％时用Luciferase报告基因质粒、LacZ的表达质粒及其它质粒（根据具体实验确定）共转染细胞（根据具体实验选择转染方法，如磷酸钙沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．转染24－36h后，吸取培养液，用预冷的PBS（无钙和镁离子）洗涤细胞。注：荧光酶的酶促反应会被痕量的钙所抑制，故用磷酸钙转染的细胞在收集细胞前应充分洗涤除去含钙介质。4．在每个培养皿中加入350μl预冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解细胞。5．在细胞裂解期间，准备足量的ml微量离心管，将ATPbuffer与luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等体积的细胞裂解液（100μl）至步骤5中的离心管中，迅速混匀，在发光仪（Luminometer）上读取吸光值。注：发光反应会迅速衰减，将细胞裂解液加入反应液后5s内必须读取吸光值。7．确保以相同操作手法读取全部样品吸光值后。做D-荧光素钾盐测试工作液是先用现配。淮安荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐活题成像
室温培育30min后加入细胞孔板中，置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中，同时加入实验确定的浓度G418，随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板，待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时，各克隆按1×105个/孔接种到24孔板，24h后细胞裂解液裂解12000rpm，4℃离心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物，停留2s后，取10s的荧光值（RLU），每个克隆设3个复孔，保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养，再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代，荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中，另外一组只有细胞，一组只有培养基作对照，设置2个复孔，常规培去上清并用PBS洗两次。镇江荧光素酶D-荧光素钾盐发射波长D-荧光素盐也算是钠盐和钾盐。
重组为一个明亮的萤光素酶。这些亚基的亲和力可以和SmBiT肽一样低，从而可以进行蛋白质相互作用的测定；也可以和HiBiT一样高，从而允许自我组装。[1]2017HiBiT®技术基于NanoBiT®系统的研究，我们将与LgBiT具有极强亲和作用的。HiBiT作为一种易于检测且具有高灵敏度的蛋白质标签，具有多种功能，例如当与基于CRIPSR的标签一起使用时，可以创建内源性报告基因模型。[1]2020Lumit™技术随着NanoBiT®技术的发展，人们认识到可以利用该系统通过结合免疫测定的组分检测多种分析物。由此产生的平台（现称为“Lumit”）提供了具有高灵敏度的简化免疫检测法。荧光素酶（英文名称：Luciferase）是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称，其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。荧光生成反应通常分为以下两步：萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸。
包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO；后者能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件：4℃冰袋运输；短期保存：4℃干燥避光长期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期长期保存：有效期一年工作液：先用现配使用方法1.体外生物发光检测1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30mg/mL的储存液(100-200×)，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3）去除细胞培养基。4）待图像分析前，向细胞内添加荧光素工作液，37℃孵育5-10min，然后进行图像分析。2.活题成像分析1）用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液，混匀。2）用µm滤膜过滤除菌。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。3）腹腔注射（.）。D-荧光素钾盐如何选择合作公司？
其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyralis的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有荧光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。[1]荧光生成反应通常分为以下两步：萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量，几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯，只有越10%的能量被转化为光，剩余的能量都变为热能而被浪费。荧光素或荧光素酶不是特定的分子，而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称，虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。更为人所知的发光生物是萤火虫，而其所采用不同的荧光素酶与其他发光生物如荧光菇（发光类脐菇，Omphalotusolearius）或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中，发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管（abdominaltrachea）的管道中输入。一些生物，如叩头虫，含有多种不同的荧光素酶，能够催化同一荧光素底物。D-荧光素钾盐使用的注意事项。无锡ATPD-荧光素钾盐公司
D-荧光素钾盐的活题成像技术。淮安荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐活题成像
5）对于检测灵敏度要求特别高的实验，建议使用新鲜配制的本产品。6）在进行D-荧光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性，此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响，从而影响检测。7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。8）本产品只作科研用途！荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够催化荧光素产生生物发光的酶的统称，其中更有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase，同时近年来研究得较多的来源于高斯氏菌的高斯荧光素酶（Gaussluciferase）。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)，可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。萤火虫萤光素酶更通用和更常见的报告基因是北美萤火虫photinuspyralis的荧光素酶，该蛋白质不需要翻译后修饰即可获得酶活性。高浓度（体内）甚至没有毒性，可用于原核和真核细胞。运输和保存运输条件：4℃冰袋运输。淮安荧光素酶编码基因D-荧光素钾盐活题成像