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南京荧光素钾盐D-荧光素钾盐活题成像原理

来源: 发布时间:2022年07月18日

    包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式:D-荧光素(游离酸),D-荧光素盐(钠盐和钾盐)。主要差别在于溶解特性:前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱,除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO;后者能够易溶于水或缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件:4℃冰袋运输;短期保存:4℃干燥避光长期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期长期保存:有效期一年工作液:先用现配使用方法1.体外生物发光检测1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成30mg/mL的储存液(100-200×),混匀。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。2)用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3)去除细胞培养基。4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.活题成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用µm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.)。做D-荧光素钾盐测试哪个公司好?南京荧光素钾盐D-荧光素钾盐活题成像原理

    而是对于所有能够产生萤光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的萤光素酶来催化不同的发光反应。**为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的萤光素酶与其他发光生物如荧光菇(发光类脐菇,Omphalotusolearius)或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中,发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管(abdominaltrachea)的管道中输入。一些生物,如叩头虫,含有多种不同的萤光素酶,能够催化同一萤光素底物,而发出不同颜色的萤光。萤火虫有2000多种,而叩甲总科(包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫)则有更多,因此它们的萤光素酶对于分子系统学研究很有用。如今研究得**透彻的萤光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫(Photinuspyralis)。[1]萤光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成,并被用于多种不同的实验。萤光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中。研究者利用基因工程已经使得小鼠、家蚕、马铃薯等一些生物可以合成萤光素酶。间接体外成像是一种强大的研究手段,可以对整个动物体中的细胞群落进行分析:将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)萤光素酶。淮安ATPD-荧光素钾盐生物公司D-荧光素钾盐测试需要满足哪些条件?

    普遍应用于整个生物技术领域,尤其是体内活ti成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。萤光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyrali'的萤火虫体内的萤光素酶,萤火虫发光的腹部或海洋的蓝色发光波浪将大自然中生物发光奇迹呈现于世。在生物化学和分子生物学的早期,这一现象被认为是发展生物分析的有力平台。1991年,Promega发布了di一代萤光素酶分析产品,并启动了基于萤光素酶的进一步创新计划,通过持续致力于研究和创新生物发光系统建立了各种不同的分析技术Promega萤光素酶技术发光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega初次提出萤火虫萤光素酶(Luc)作为一种新兴报告基因技术的应用可能性。当时的人们认为,萤火虫萤光素酶具备的生物发光特性、极高的灵敏度和快速简单的检测流程等特点,可能会对分子生物学家的研究产生重要的影响。几个月后,di一代萤火虫萤光素酶报告基因载体和检测试剂在Promega诞生,使这项新技术正式并更范围广地为全球研究人员服务。

    在食品卫生领域由于ATP生物发光技术无需培养过程,操作简便、灵敏度高,数分钟内可得到结果,具有其它微生物检测方法无法比拟的优势,是目前检测微生物更快的方法。荧光素是更受欢迎的多功能生物荧光底物之一。在萤火虫和几种其它甲虫中发现了萤火虫荧光酶/荧光素。通过中间体dioxetanone介导作用,荧光素酶氧化ATPji活的荧光素。萤火虫荧光素酶在ATP的辅助下氧化荧光素产生荧光。这个反应发生的几秒内在560nm处的化学荧光达到更高峰,当荧光素和ATP都超量存在的条件下,发射光与荧光素酶的活性成比例关系。萤火虫荧光素酶很早以前就用于与抗体结合形成偶联物,作为免疫分析中用荧光素作为底物进行检测的标签。与HRP和碱性磷酸酶相比,荧光素酶不耐化学修饰。这个酶的一个特殊的优点是,除了高灵敏度外,在哺乳动物组织中内源性荧光素酶的活性很低。荧光素酶另一个重要的作用是用于卫生监测。荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染,因为产生荧光所需的ATP存在于所以活ti生物中。这种类型的ATP生物荧光特性足以保证对食品表面的检测,无论是在加工制作工程中设备的污染还是产品的污染都能检出。D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物。D-荧光素钾盐的测试方法有哪几种?

    每孔加入100μl养24h后,Luciferin使其终浓度为150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活题成像系统检测,分析发光强度与细胞数之间的相关性。4)细胞生长曲线绘制MCF7-luc细胞和作为对照取表达荧光素酶的MCF-7细胞,接种于24孔板,接种密度为2×104/孔。细胞接种后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔细胞,用细胞计数仪测定细胞数。以细胞生长天数为横坐标,细胞数目为纵坐标,分别绘制两种细胞生长曲线。二.动物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周龄,体重(15±2)g,雌雄各3只。取对数生长期的MCF-7用PBS重悬为2.5×10/ml悬液,每只裸鼠左右背侧近腋部皮下接种100μl,共接种6只。接种后第5d采用德国BERTHOLD公司的活题成像系统检测信号强度。以后每5d观测一连续观测30d。观测前每只裸鼠戊巴比妥钠麻醉(计量为:35mg/kg体重),按150mg/kg体重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,进行活题成像观察皮下肿大的瘤的生长情况,定量分析各时间点的荧光值。绘制肿大的瘤皮下生长曲线.MCF-7-luc细胞裸鼠皮下移植瘤的病理形态学观察MCF-7-luc细胞裸鼠皮下接种后25d,脱颈处死小鼠,取肿大的瘤组织,制成石蜡切片,切片厚度为3μm。做D-荧光素钾盐测试价格是多少。苏州荧光素钠盐D-荧光素钾盐使用说明

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    因此只有在活细胞内才会产生长发生光现象,并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。结构与性能荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应,生成氧化荧光素(oxyluciferin),并产生长发生光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的,约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时,只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。(1)荧光素不会影响动物的正常生理功能。(2)荧光素是280道尔顿的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。(3)荧光素在体内扩散速度快,可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢,持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光,10min后强度达到稳定的更高点,在更高点持续约20~30min后开始衰减,约3h后荧光素排除,发光全部消失,更佳检测时间是在注射后15~35min之间;若进行荧光素静脉注射,扩散快,但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg,即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。(4)观察时间的间隔没有更短限制,只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程。南京荧光素钾盐D-荧光素钾盐活题成像原理

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