虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以比较大化样品的回收,同时节省过滤时间。截留微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据NMWL分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL的超滤膜应该截留至少90%以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时 膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小 会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截 留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以比较大化样品的回收,同时节省过滤时间。购买超滤浓缩管就找益启生物公司。虹口区默克0.5ml超滤浓缩管一级代理
蛋白亲和纯化(无需换液和浓缩) * 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。 3次低速离心,总耗时~75分钟(含60分钟孵育时间) 1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂(沉降的柱床体积)和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。(柱床)树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。 2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*,其间可温和搅动促进结合。崇明区Merck超滤浓缩管规格超滤浓缩管代理销售哪家比较靠谱。
脱盐/缓冲液置换并浓缩 5次低速离心,总耗时~35分钟 1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。 2. 优化选做:加入1.5 mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1 min。 3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。 4. 加入1.5 mL样品,4,000×g离心15 min进行浓缩。 5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15 min,换液的同时进行浓缩。 6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。 * 进行较大体积操作时,可以适当延长离心时间,也可参考Amicon® Pro完整操作说明书 查看详细信息。
抗体标记 适合25-200μg样品操作 5次低速离心,总耗时~50分钟 1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。 2. 加入抗体样品 • 对于比较稀释的样品(< 1 mg/mL) - 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)。 - 加上至多1 mL抗体样品, 4,000×g离心15 min。 • 对于浓度较高的的样品(≥ 1 mg/mL) - 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)中加入至多100μL样品。 - 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)中加入至多100μL样品。 大体积样品浓缩 Centricon® Plus-70离心浓缩装置 用于15-70mL生物溶液的快速浓缩等操作。70mL的样品在25分钟内浓缩至350μL;死体积设计确保样品不会被离干而损失。 你知道超滤浓缩管的用途吗?
首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的样本在滤过液中,那么请排查: a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。 c)离心机**近是否有校准过? d)是否***尝试这个蛋白?上海超滤浓缩管供应商。奉贤区浓缩管联系电话
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提供的超滤管是没有经过去内***处理的,同时由于内***通常以多聚体的形式存在,大小 在10-1000KD之间不等,在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗,随后用Milli-Q®水/缓冲液清洗的步骤去除大部分内***。关于针对Amicon®,Microcon® , Centricon®尝试过的内***去除方案。 Amicon® Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜,这种材质是蛋白吸附比较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白,它们和膜的非特异吸附可能会增强,对于这种情况,可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理。也可以尝试换成Amicon® Ultra 0.5或2来进行实验,通过减小膜面积来降低非特异性吸附。虹口区默克0.5ml超滤浓缩管一级代理