巧亦捷PCR技术在动物疫病检测的应用

现如今，大多数宠物医院还是使用胶体金方法对宠物疾病病原体进行检测，而此种检测方法准确性低，灵敏度不高，通常出现检测结果不准确而导致宠物误诊。如果是误诊，宠物则无法得到很好的诊疗，甚至会死亡。巧亦捷在宠物病原体核酸检测试剂系列中应用了PCR-荧光探针法，在PCR反应体系中加入特异的荧光探针，在实验条件下对宠物病原体特异性基因片段进行扩增，根据荧光强度的变化进行检测，并针对各种样品进行了反应体系的优化，灵敏度可达1000个拷贝，具防污染功能，特别适合在宠物医院使用。本产品操作简便，简单培训即可掌握操作方法。巧亦捷全自动核酸检测一体已实现覆盖猫、犬肠道类、呼吸道类、血液类、人畜共患类等多种病原体的诊断。巧亦捷PCR技术在动物疫病检测的应用

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（热稳定DNA聚合酶）的作用下，由一对特异性引物经热变性-退火-延伸反应，三个不同温度的循环处理使得DNA由少量扩增到多量的一种体外DNA扩增技术。在反应体系内，以一对人工合成的寡核苷酸作为扩增引物，第一步，模板DNA变性，以构成脱氧核糖核酸的四种脱氧核苷酸为底物，目的基因作为模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA经过80-90℃高温变性，使模板DNA双链经PCR扩增形成的双链解离成单链。第二步，模板DNA与引物退火（复性），模板DNA解离成单链后温度降至50-60℃，引物与模板DNA单链互补配对。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP为反应原料半保留复制合成一条新的模板DNA链。这三个步骤为一个循环，2-4分钟即可完成一个循环，2-3小时就能使极微量的DNA、片段、甚至单拷贝基因复制到几百万倍，从而实现对靶DNA的放大。由于扩增碱基序列按照靶DNA复制，因此PCR反应具有高度特异性。巧亦捷PCR技术在动物疫病检测的应用巧亦捷使用的PCR扩增酶酶活是同类酶的3倍以上，检测灵敏度高。

巧亦捷核酸检测一体机的优势在于：1、全流程：以不**灵敏度和特异性为前提，将核酸提取、分子扩增、荧光检测集成在一张生物芯片上，可实现真正意义上的“样本进-结果出”。2、速度快：人工操作时间*为2分钟，从样本进到结果出只需35分钟。3、操作简单：沿用传统的检测方法学，无需复杂的实验室以及苛刻的反应环境，也无需专业的培训，随到随检，目前，巧亦捷采用“设备+试剂“的销售，与传统中心实验室相比，拥有同样的核酸检测结果的准确度，并且体积更小更易携带，检测时间短，更能满足即时检测的需求

巧亦捷推出的核酸检测一体机可以实现多种联检，比如猫的呼吸道有症状，可能传染原因包括疱疹病毒、衣原体、支原体等，到底是哪种情况？其实医生很难判断，通过多重PCR检测试剂，可提高检出率，降低操作复杂度。不需要一个病原一个病原去测，一个反应就可以把3种病原同时检测。极大减少了兽医师的检测时间及检测成本。且巧亦捷核酸一体机的设计，可有效避免PCR扩增时可能产生的污染，因为其实PCR基于本身原理，敏感性很高，实际上大多数污染产生于扩增过程中，比如说，在扩增过程中造成PCR体系泄漏，就会比较严重，而通过薄膜微流控技术，全封闭的检测试剂及检测过程，可比较大限度减少污染。传染病是由某些具有致病性的微生物，如细菌、病毒等引起的，能够在某种动物或多种动物之间传播的一些疾病。

PCR检测技术以灵敏度高，稳定性强为优势深受兽医师的青睐，以常见的猫传腹为例：猫传腹是由猫肠冠状病毒的突变引起。猫传腹为分干性和湿性两种。如果不用PCR技术的话，干性和湿性传腹均不好确诊。但如果采用PCR技术，抽取患猫腹腔或胸腔积液进行检测，约45分钟就可以确诊是否是湿性猫传腹。而针对于干性传腹，大多数病猫会呈现淋巴结肿大。所以也可以通过PCR技术检测淋巴结的穿刺液来确诊。PCR技术在猫传腹方面的应用极大缩短了确诊的时间，从而争取到更多的诊疗时间，患猫生存的机会也就更大。巧亦捷核酸一体机的检测项目范围很广，像猫瘟、猫鼻气管炎、猫上呼吸道的各类症状、犬流感、犬瘟、犬细小、犬呼吸道和肠道的疾病、狂犬病等多种疾病均可以快速确诊，为诊疗争取了更多的时间。无论是由病毒、细菌，还是原虫、寄生虫等引起的犬猫传染性疾病都可利用巧亦捷核酸一体机进行诊断。江苏巧亦捷PCR检查

巧亦捷核酸检测一体机操作非常简单，只需要放入样本就可以了，不需要手工进行核酸提取，也避免了样本污染。巧亦捷PCR技术在动物疫病检测的应用

巧亦捷核酸一体机采用的探针法荧光PCR与常规PCR的不同之处在于：在上、下游引物外还加入了具有序列特异性的探针（探针本身具有荧光标记），该探针根据需要扩增的靶序列设计因此只能与待检测序列结合，与染料法相比提高了实验的特异性。目前市场上的探针主要种类有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探针应用宽泛。TaqMan探针的结构：长度与普通PCR引物类似，大约20bp左右。在5’与3’端各标记有一个荧光基团，5’的荧光基团称为报告基团（Report），3’的荧光基团称为淬灭基团（Quencher）。TaqMan探针的性能：在探针结构完整的情况下用特定的波长激发报告基团，由于报告基团与淬灭基团的空间位置很近，因此报告基团能够通过FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）将接受的能量转移到淬灭基团，使后者以发射荧光或热量的方式释放能量，而报告基团并不发射特定波长的荧光信号。巧亦捷PCR技术在动物疫病检测的应用