南京医学膜片钳全细胞记录方案

膜片钳技术——打开细胞电生理之门：定义：膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”，是一种基于电工学和电化学原理的分析手段，可以通过检测细胞的电信号(电生理性质)来研究化学物质、电、机械力等刺激因素对细胞功能的影响，从而帮助揭示细胞在生命活动中的化学和生物学机制。原理：膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来，由于电极与细胞膜的高阻封接，在电极笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离，因此，此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个极为敏感的电流监视器（膜片钳放大器）测量此电流强度，就替代单一离子通道电流。使用膜片钳全细胞记录技术观察拮抗剂对烟碱受体激动剂量效曲线的影响，来确定其作用的动力学特征。南京医学膜片钳全细胞记录方案

膜片钳的数据如何处理：1）细胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片钳的基本方式,其它方式由此衍生。这种膜片形式比较稳定因细胞骨架及有关代谢过程是完整的,故对细胞结构和环境干扰比较小。但这种膜片形式易在电极形成囊泡,从而细胞骨架可能有所变化。另外这种膜片不能控制细胞内成分。且任何影响膜电位的处理均可影响其电位水平。2）内面向外式膜片( inside outpatch)细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。连云港全自动膜片钳全细胞记录方案膜片钳技术的应用范围：在心血管药理方面的研究。

膜片钳技术及其应用：它是作者在\"膜片钳技术及其应用\"领域所进行的研究工作的总结，同时也吸取了国际上的先进技术和新近的研究成果。内容包括:细胞电生理与膜片钳技术，膜片钳系统的组建及实验技术概要，膜片钳放大器原理与低噪声设计，单通道和全细胞电流记录技术，数据采集和分析，细胞分泌活动的膜电容监测技术和安培测量技术，细胞内钙离子浓度的测量及钙库特性，脑切片膜片钳技术，心肌细胞的药理特性和植物细胞的离子通道特性。

膜片钳的数据如何处理：穿孔膜片(perforated patch)是为克服常规全细胞模式的胞质渗漏问题,有学者将与离子亲和的制霉菌素或二性霉素b经微电极灌流到含有类甾醇的细胞膜上,形成只允许一价离子通过的孔,用此法在膜片上做很多导电性孔道,借此对全细胞膜电流进行记录。由于此模式的胞质渗漏极为缓慢,局部串联阻抗较常规全细胞模式高,所以钳制速度很慢,也称为缓慢全细胞模式。它适合于小细胞的电压钳位,对于直径大于30μm的细胞很难实现钳位。不足之处是由于电极与细胞间交换快,细胞内环境很容易破坏,因此记录所用的电极液应与胞浆主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的缓冲成分和能量代谢所需的物质。膜片钳使用操作注意：拉制仪提前预热（至少30min）。且用完及时关闭。

膜片钳实验常见问题及解决方法：膜片钳技术是电生理记录的常用手段，目前在科学研究中使用越来越普遍。但在具体膜片钳实验操作的过程中，总会遇到各种各样的问题，对实验人员造成很多困扰。本次讲座主要从实验角度出发，以简单，实用的原则，着重讲解实验中遇到的各种问题，以及解决方法。从选择实验样本开始，按照一般实验进行的顺序，逐步延伸，一直到如何搭建自己个性化的膜片钳系统，使大家对膜片钳的基础知识以及膜片钳实验中遇到的各种典型问题及解决办法有系统的了解。膜片钳使用的注意事项：干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。杭州神经生物学膜片钳服务

膜片钳的应用：心肌细胞通过各种离子通道对膜电位和动作电位稳态的维持而保持正常的功能。南京医学膜片钳全细胞记录方案

一种提高膜片钳实验效率的方法与流程：膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用，也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高，一般地，实验人员需要经过严格的长期的训练，才能准确且快速的操作。南京医学膜片钳全细胞记录方案

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