膜片钳又称单通道电流记录技术,用特制的玻璃微吸管吸附于细胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又称巨阻封接,被孤立的小膜片面积为μm量级,内中只有少数离子通道。然后对该膜片实行电压钳位,可测量单个离子通道开放产生的pA(10的负12次方安培)量级的电流,这种通道开放是一种随机过程。通过观测单个通道开放和关闭的电流变化,可直接得到各种离子通道开放的电流幅值分布、开放几率、开放寿命分布等功能参量,并分析它们与膜电位、离子浓度等之间的关系。还可把吸管吸附的膜片从细胞膜上分离出来,以膜的外侧向外或膜的内侧向外等方式进行实验研究。这种技术对小细胞的电压钳位、改变膜内外溶液成分以及施加药物都很方便。膜片钳技术的应用范围:对单细胞形态与功能关系的研究。金华药理学膜片钳电生理技术供应商
膜片钳法的各种模式:细胞吸附模式:将膜片微电极吸附在细胞膜上对但离子通道电流进行记录的模式。其优点是在细胞内环境保持正常的条件下可以对离子通道活动进行观察记录。但是由于不能认为直接地控制细胞内环境条件也不能确切的潘明细胞内点位,所以其缺点是不清楚膜片上的实效点位。膜内面向外模式:从细胞吸附模式将已形成巨阻抗封接的膜片微电极向上提起时,则膜片即从细胞体上被切割分隔下来,形成膜内面向外的模式。常规全细胞模式:在细胞吸附模式上将膜打穿成孔,记录膜片以外部位的全细胞膜的离子电流,这时全细胞模式。湖州药理学离子通道方案膜片钳技术可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。
膜片钳的技术原理:膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来,由于电极尖锐端与细胞膜的高阻封接,在电极尖锐端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离,因此,此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管,用一个极为敏感的电流监视器(膜片钳放大器)测量此电流强度,就表示单一离子通道电流。膜片钳技术的建立,对生物学科学特别是神经科学是一具有重大意义的变革。这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的(或多个)的离子通道分子活动的技术。此技术的出现自然将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同分野必然地融汇在一起,改变了既往各个分野互不联系、互不渗透,阻碍人们全部认识能力的弊端。
膜片钳电生理技术:神经元细胞膜上有离子通道,它们控制电荷流入和流出细胞,从而调节神经元激发。一种用于研究这些通道的生物物理学特性的极为有用的技术被称为膜片钳记录。在这种方法中,神经科学家把抛光的玻璃微吸管置于细胞上通过吸力形成高电阻封接。这个过程分隔了一小"片"包含一种或多种离子通道的膜。通过微吸管中的电极,研究人员可以"钳制"或控制膜的电属性,这对分析通道活动很重要。该电极还能记录跨膜电压的变化,或离子通过膜的流动。全自动膜片钳系统技术指标:信号准确,噪声少,使用了先进的微型“法拉第板”替代传统的“法拉第笼”。
膜片钳在通道研究中的重要作用:对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究:通过对各种生理或病理情况下细胞膜某种离子通道特性的研究,了解该离子的生理意义及其在疾病过程中的作用机制。如对钙离子在脑缺血神经细胞损害中作用机制的研究表明,缺血性脑损害过程中,Ca2+ 介导现象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道开放,过多的Ca2+进入细胞内就出现Ca2+超载,导致神经元及细胞膜损害,膜转运功能障碍,严重的可使神经元坏死。在大多数膜片钳实验,要求所有实验仪器及设备均具有良好的机械稳定性。杭州全自动膜片钳实验哪家好
膜片钳使用操作注意:在仪器使用以前及使用之后按按照使用时长做好登记工作。金华药理学膜片钳电生理技术供应商
膜片钳使用的注意事项:1.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多(1cm左右为适),以防液体进入银丝底部增加噪声。2.安装玻璃微电极时,电极应与银丝平行,防止刮蹭银丝电极。3.玻璃微电极需先用甲醇浸泡,再用酒精灯微烧两端,使其平滑。4.换液时应时刻观察浴槽,防止液面过低或液体溢出污染镜头,很适液面为微高于出液口。5.浴槽及灌流系统用毕请及时清洗,防止长菌影响实验。6.打雷天气必须禁止膜片钳实验。7.干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。8.每位实验者请在E盘建立自己的文件夹储存数据。金华药理学膜片钳电生理技术供应商
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