用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法:将已存放血浆的试管置入-20~0℃环境下保存备用;将血浆分离提取胎牛血清,具体步骤如下:取6-12g氯化钠、0.1-0.5g磷酸二氢钾和1.4-2.4g磷酸二氢钾放入容器中,向其中加入300-700mL去离子水,搅拌均匀,使用质量分数为10-20%的盐酸溶液调节pH为7.0-7.3,将上述所收集的血浆倒入容器中,搅拌均匀,温度设定为25-38℃,静置8-20min,得混合液C;22)将上述的混合液C放入离心机中离心分离8-20min,转速设定为3000-10000r/min,取上清液。有些情况下胎牛血清结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到释放毒性作用。杭州标准级血清哪里有卖
胎牛血清对细胞贴壁中的作用:在细胞培养时,大部分来自实体组织感官的细胞会贴壁。它们在机体内时,也是与其他细胞或者细胞外基质结合的,贴壁对维持细胞的良好形态和促进细胞的增殖有益处。有人培养许旺细胞,发现贴壁良好的细胞,其增殖率也较高。人的造血干细胞培养,更是需要有贴壁细胞构成“造血微环境”。有人发现这些贴壁细胞包括成纤维细胞,巨噬细胞,上皮样细胞,脂肪细胞,它们交错连接,构成网状支架结构。培养基中加入牛血清,对于粘附细胞的贴壁也很有帮助。牛血清中含有玻连蛋白、纤黏连蛋白,对细胞粘附都有促进作用。需注意,热灭活小牛血清会降低血清对细胞粘附的促进作用,尤其在细胞旋转培养时更为明显。镇江OriCell胎牛血清品牌胎牛血清应用在哺乳动物细胞培养中。
为什么要热灭活胎牛血清?胎牛血清加热可以灭活补体系统。开启的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,开启淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活胎牛血清。为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现少量沉淀?胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。
胎牛血清的意义:胎牛血清是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血,丰富的生长发育因子,胎牛血清非常适合各种细胞的培养,胎牛血清是细胞培养中重要的天然培养基,胎牛血清起到为细胞提供营养、支持、保护的作用。好的的胎牛血清是让细胞“快乐成长”的必备营养物,但劣质的胎牛血清,也可能会成为导致细胞死亡的“定时炸雷”。因此,挑选需要擦亮们的双眼。蛋白含量,总蛋白含量:胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,可能说明牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺入水或者其他溶剂。血红蛋白含量:标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高;反之,数值越低。免疫球蛋白:免疫球蛋白的数值能侧面反映出时的牛龄情况,新生牛血清中容易检出IgM,IgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低。血清对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶。
胎牛血清融化方法:只要2.5个小时,温和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子,让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间,而且较大限度减少了血清沉淀出现的几率。血清融化过程中,蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白,血清在培养细胞中,比较重要的是利用它的活性的因子,因此,融化过程中较大限度地保留因子的活性,就变得非常重要。回忆一下,细胞复苏时,要保持细胞的活性,我们是要遵循“快融”原则还是“慢融”原则呢?快融!血清同样如此!三步法需要两个半小时,4℃过夜需要大约10个小时(冰箱一般设2-8℃,所以各实验室融化时间会稍有出入)。胎牛血清在水浴过程中,胎牛血清的液面要完全浸在水中。无锡不含外泌体胎牛血清供应商
胎牛血清提供对维持细胞指数生长的Hormone,基础培养基中没有或量很少的营养物。杭州标准级血清哪里有卖
选购胎牛血清:为了保证胎牛血清产品的均一性和稳定性,胎牛血清生产需遵循相关规定进行操作。一般来说,胎牛血清制备需经过以下几个步骤:采集,离心,分离,无菌过滤,用来制作血清的牛血,是通过采集多头牛的血液混合而成的,因此,想要在同一批次得到大批量品质稳定的血清,获得大量健康、符合当地法律法规的供体动物,是先决条件。采集(5-8月龄牛胚胎)、离心以及粗血清分离的过程,不能保证完全的无菌,因此,整个过程中,无菌过滤就成为重中之重。严格的无菌过滤,能够尽可能祛除细菌、支原体等微生物的污染,保证胎牛血清品质。杭州标准级血清哪里有卖
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