用于体外细胞培养的胎牛血清及其制备方法:将已存放血浆的试管置入-20~0℃环境下保存备用;将血浆分离提取胎牛血清,具体步骤如下:取6-12g氯化钠、0.1-0.5g磷酸二氢钾和1.4-2.4g磷酸二氢钾放入容器中,向其中加入300-700mL去离子水,搅拌均匀,使用质量分数为10-20%的盐酸溶液调节pH为7.0-7.3,将上述所收集的血浆倒入容器中,搅拌均匀,温度设定为25-38℃,静置8-20min,得混合液C;22)将上述的混合液C放入离心机中离心分离8-20min,转速设定为3000-10000r/min,取上清液。透析胎牛血清是在胎牛血清的基础上进行加工的。东莞不含外泌体胎牛血清厂家
如何区别真假胎牛血清:外观,拿到血清,较先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要,颜色根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采的血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。国产血清的点很分散,大多是由屠户采的血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量较好的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活胎牛血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。东莞不含外泌体胎牛血清厂家将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。
如果胎牛血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,应该如何去除?胎牛血清中的沉淀物出现有很多种原因,但较普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白在胎牛血清解冻后,也会存在于胎牛血清中,这也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮状沉淀物,并不影响胎牛血清本身的质量。如果想要去除这些絮状沉淀物,可以采取离心法,400g,离心1~2分钟,将上清重新分装即可使用。胎牛血清中含有丰富的促进细胞生长的成分,如维生素、运输蛋白、微量元素、生长因子等。
胎牛血清是血液凝固后的液体部分,不含血细胞、纤维蛋白及凝集因子等,含有多种对细胞生长必需的营养因子及大分子物质。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外,重要的是,胎牛血清中含有大量对细胞生长必需的生长因子。胎牛血清也含有一些小分子物质,如氨基酸、糖类、脂类及Hormone类物质。胎牛血清应用在哺乳动物细胞培养中;因此,胎牛血清应用很普遍。比如,胎牛血清能够用在科研、工业生产、人或兽疫苗生产的质量控制及生物技术药物的质量控制领域。相对于新生动物血清或成体动物血清来说,胚胎期动物血清有什么优点?与其它类型血清相比,胚胎期动物血清含有更多的生长因子,及较少的gamma球蛋白含量。有些情况下胎牛血清结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到释放毒性作用。
胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量3.5%~5.0%(w/v)。3、血红蛋白含量≤0.02%(w/v)。4、无菌检验阴性。5、支原体检验阴性。6、细菌内的毒性≤5(EU/ml)。7、牛腹泻病毒阴性。8、大肠杆菌噬菌体阴性。9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线(接种浓度)较大增殖浓度≥2.5×106个/ml,细胞倍增时间≤15h克隆率≥85%。胎牛血清提供对维持细胞指数生长的,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。东莞不含外泌体胎牛血清厂家
血清在溶解过程中必须规则地摇晃均匀。东莞不含外泌体胎牛血清厂家
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