南通药理学膜片钳全细胞记录研究方案

膜片钳技术基本原理与特点：膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴，两者的区别关键在于：①膜电位固定的方法不同；②电位固定的细胞膜面积不同，进而所研究的离子通道数目不同。电压钳技术主要是通过保持细胞跨膜电位不变，并迅速控制其数值，以观察在不同膜电位条件下膜电流情况。因此只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。目前电压钳主要用于巨大细胞的全性能电流的研究，特别在分子克隆的卵母细胞表达电流的鉴定中发挥着其他技术不能替代的作用。膜片钳技术是在电压钳技术发展起来的，电压钳是利用负反馈技术将膜电位在空间和时间上固定于某一测定值。膜片钳使用的注意事项：在放大器打开时不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝。南通药理学膜片钳全细胞记录研究方案

膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的较重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术（Conventionalpatchclamptechnique）发展到全自动膜片钳技术（Automatedpatchclamptechnique）。传统膜片钳技术每次只能记录一个细胞（或一对细胞），对实验人员来说是一项耗时耗力的工作，它不适合在药物开发初期和中期进行大量化合物的筛选，也不适合需要记录大量细胞的基础实验研究。全自动膜片钳技术的出现在很大程度上解决了这些问题，它不只通量高，一次能记录几个甚至几十个细胞，而且从找细胞、形成封接、破膜等整个实验操作实现了自动化，免除了这些操作的复杂与困难。这两个优点使得膜片钳技术的工作效率很大程度提高了！签于全自动膜片钳技术的这些优点，目前已经普遍的用于药物筛选。无锡细胞生物学实用膜片钳网站全自动膜片钳系统技术指标：药液交换非常迅速，作用时间快。

一种提高膜片钳实验效率的方法与流程：膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用，也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高，一般地，实验人员需要经过严格的长期的训练，才能准确且快速的操作。

膜片钳在通道研究中的重要作用：应用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型，并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率，还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术，膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。膜片钳在通道研究中的重要作用：利用膜片钳技术还可以用于药物在其靶受体上作用位点的分析。

膜片钳技术之全细胞式与细胞吸附式的区别：全细胞式记录这个名字乍听上去好像和细胞吸附式没啥两样，无非就是把电极戳在细胞上然后记录它的电活动。但事实是，这两者存在天壤之别。首先的一大区别体现在外部构型上：在cell-attached的记录中，我们不需要用电极戳破细胞膜，只需将其怼在细胞膜上即可；但在whole-cell的记录中，我们不只要将电极怼进细胞膜内，而且还不能怼得过深或过浅，否则你就无法记录到有用的电信号。概括一下就是，要形成全细胞记录必须打破细胞膜，但由于这个操作比较厉害，所以要破膜时请相信玄学。其次，第二大区别在电阻补偿上：在cell-attached的记录中，由于我们无需打通细胞内外膜，因此细胞膜上的各种离子通道或蛋白质就没有串联在电路当中，但是在whole-cell中，串联电阻（Rs）就存在了，因此软件输出的命令电压也就不等于细胞的跨膜电位，故我们需要对其进行补偿。这些注意事项包括：电极电容及细胞膜电容补偿问题，漏电流问题，液接电位的校正问题，空间钳位问题，细胞内容物被电击内液稀释问题，电极内液的成分问题等。膜片钳使用的注意事项：浴槽及灌流系统用毕请及时清洗，防止长菌影响实验。黄山医学离子通道应用

膜片钳技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用。南通药理学膜片钳全细胞记录研究方案

膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法，目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响，替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作，实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后，将研究对象细胞养在玻片上，以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上，此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。南通药理学膜片钳全细胞记录研究方案

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