高性价比PEI转染试剂优化要素

特别提醒1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。PEI转染试剂可以转染哪些细胞？高性价比PEI转染试剂优化要素

稳定转染方法：1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。PEI转染试剂使用比例分子量为25000的线性PEI即Polysciences23966转染效率比较高。

稳定转染方法1.接种细胞：转染前，用胰酶消化细胞并计数。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，总体积如表1所示，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。

稳定转染方法：准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。5.转染24h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在CO2培养箱中37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。有谁用过25K的PEI转染试剂？

材料：质粒DNA指数生长的真核细胞PEI（聚乙烯亚胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI储存液（100μM）：称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm滤膜过滤，储存于4℃备用。1×HBS（pH7.4）：将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水，加入20ml1M的HEPES，调pH值到7.4，定容至1L，过滤（0.2μm滤膜）后储存于4℃备用。方法：1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。PEI转染试剂主要用于用于抗体、蛋白和病毒载体生产。Thermo FisherPEI转染试剂用途

如何优化PEI转染试剂转染时的比例？高性价比PEI转染试剂优化要素

在政策促进下，未来3—5年内，我国将在医药健康短缺地区建设一批高水平临床医治中心、高层次的人才 培养基地和高水平的科研创新与转化平台，培育一批品牌优势明显、跨区域提供高水平服务的集团。在《2019年本》鼓励类条目中增加了“血小板裂解液，WB自动孵育系统，微流控器官芯片，蓝牙无线标签机的开发和生产”。在中药产业领域，增加了“中药饮片炮制技术传承与创新，中药经典名方的开发与生产，中药创新的研发与生产”等内容。根据血小板裂解液，WB自动孵育系统，微流控器官芯片，蓝牙无线标签机相关领域极新技术发展趋势，《2019年本》在鼓励类条目中新增了新型技术开发和应用的有关内容。例如，在化学原料药领域增加了“连续反应”等技术，在技术领域增加了“基因医治”和“抗体偶联”等技术，在药用包装材料领域增加了“中性硼硅药用玻璃”等新型材料与技术的开发应用，在医药领域增加了“人工智能辅助医药设备”等新技术内容。随着科学技术发展，医药冷链物流技术不断涌现，同时在我国高度重视下，冷链物流标准逐渐完善。但我国医药健康仍存在体系不完善、物流成本高和技术、设施落后的问题。在市场机遇与现存问题面前，如何把握医药健康未来发展趋势显得尤为重要。高性价比PEI转染试剂优化要素

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