Thermo FisherPEI转染试剂作用原理

PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限，被逼无奈只能放弃脂质体2000，选择PEI，以至于相当长的时间内，转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点：1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书，所用质粒尽量去内2.转染时，一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中，顺序不可错，轻微混匀，静止20min3.转染后4小时，一定要换液！换含有FBS的完全培养液！因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选，建议把血清浓度适当提高。PS：事实证明，PEI是可行的，已经做出稳定细胞系了。哪家有GMP等级的PEI转染试剂？Thermo FisherPEI转染试剂作用原理

抗体药物研发客户提供小众创新产品，包括从Researchgrade到cGMP等级的无动物源培养基质，转染试剂、病毒转导试剂、基因编辑工具等产品和定制服务，支持ATMP（AdvanceTherapyMedicinalProducts）药物研发从R&D到Clinicaltrial以及后期商业化的无缝转化；以及提供药物开发和探索的抗体文库定制和商业授权灵活的CHO工程细胞株以支持抗体药物的商业化生产，以此希望帮助国内科研工作者快速地接触世界范围内的技术，分享研发工具进步带来的技术红利，终为细胞、基因产业以及再生医学行业等乃至整个生命科学行业赋能！高性价比PEI转染试剂品牌分子量为25000的线性PEI转染试剂即Polysciences23966转染效率比较高。

注意事项质粒质量：请务必使用高质量转染级无内质粒（推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒）。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8~2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。

线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物，分子量25000，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广适用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下，它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性PEI转染试剂具有如下优点：优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将eGFP表达质粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞，转染16h后，超过95%的细胞表达eGFP。

PEI转染试剂使用的注意事项有哪些？

材料：质粒DNA指数生长的真核细胞PEI（聚乙烯亚胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI储存液（100μM）：称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中，0.2μm滤膜过滤，储存于4℃备用。1×HBS（pH7.4）：将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水，加入20ml1M的HEPES，调pH值到7.4，定容至1L，过滤（0.2μm滤膜）后储存于4℃备用。方法：1．细胞分盘：通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上（根据实验需要选择培养皿，使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90％）。根据细胞贴壁情况于含5％CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。

PEI转染试剂从96孔板到1000L生物反应器规模都能提供连续性的高表达蛋白或病毒。cGMP级PEI转染试剂使用比例

PEI转染试剂的使用方法是怎样的？Thermo FisherPEI转染试剂作用原理

准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后，添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences产品，欢迎咨询上海曼博生物！Thermo FisherPEI转染试剂作用原理

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