所谓real-timeQ-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,之后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在real-time技术的发展过程中,两...
PCR的反应条件:dNTP浓度过高会加快反应速度,但同时还可以增加碱基的错误掺入率。引物浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增。TaqDNA聚合酶浓度过高会引起错配和非特异性产物扩增,低则合成产物量减少...
膜片钳记录的几种形式:内面向外膜片(inside-out patch) 高阻封接形成后,在将微管电极轻轻提起,使其与细胞分离,电极端形成密封小泡,在空气中短暂暴露几秒钟后,小泡破裂再回到溶液中就得到“...
膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音...
脑片膜片钳实验全细胞记录:用可视化膜片钳寻找清楚、且表面光滑、折光性较好的突触后神经元。在加了正压后,将记录电极移入脑片视野中,并接近事先选好的神经元,然后,调整电极与神经元的相对位置,利用负压形成稳...
膜片钳实验常见问题及解决方法:膜片钳技术是电生理记录的常用手段,目前在科学研究中使用越来越普遍。但在具体膜片钳实验操作的过程中,总会遇到各种各样的问题,对实验人员造成很多困扰。本次讲座主要从实验角度出...
膜片钳操作实验:膜片钳放大器是整个实验系统中的中心,它可用来作单通道或全细胞记录,其工作模式可以是电压钳,也可以是电流钳。从原理来说,膜片钳放大器的探头电路即I-V变换器有两种基本结构形式,即电阻反馈...
膜片钳法的各种模式:膜外面向内模式:从全细胞模式将膜片微电极向上提起可得到切割分离的膜片,由于它的细胞膜内侧面面对膜片微电极腔内液,膜外面自然封闭而对外,所以这个模式被称为莫外面向内模式。开放细胞吸附...
膜片钳技术发展至今,已经成为现代细胞电生理的常规方法,它不只可以作为基础生物医学研究的工具,而且直接或间接为临床医学研究服务,目前膜片钳技术普遍应用于神经(脑)科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病...
膜片钳技术之全细胞记录的实验流程:(1)仔细检查实验系统各仪器间的线路连接。(2)依次打开各仪器的电源开关和实验软件,检查各参数的初始设置。(3)将样品置于倒置显微镜的载物台上。(4)电极安装。(5)...
膜片钳只适用于药物的初筛和二次筛选,且对样本有很高的选择性,而传统的膜片钳技术可适用于各种样本,应用范围广,能够分析检测所有的离子通道类型,同时能够分析离子通道的动力学特征。因此目前,传统膜片钳技术仍...
膜片钳法的各种模式:膜外面向内模式:从全细胞模式将膜片微电极向上提起可得到切割分离的膜片,由于它的细胞膜内侧面面对膜片微电极腔内液,膜外面自然封闭而对外,所以这个模式被称为莫外面向内模式。开放细胞吸附...