单光子显微技术是成熟的荧光显微技术,但由于其使用的激发光波长较短,成像深度有限;能量较大,会造成对荧光物质的漂白,光毒性严重。激光共焦扫描显微镜由于共焦显微镜的孔径很小,实现样本三维成像要逐点扫描,成像速度慢,对样本损害大,很难用于长时间活细胞成像。而宽场显微镜能够很好地实现实时动态成像,光漂白小,因而较早应用于活细胞内的实时检测,但宽场显微镜由于离焦信号的干扰,难以实现多维成像。双光子荧光显微镜(Two-PhotonLaser-ScanningMicroscopy)。双光子显微成像技术是近些年发展起来的结合了共聚焦激光扫描显微镜和双光子激发技术的一种新型非线性光学成像方法,采用长波激发,能对组织进行深层次成像。常用的比较好激发波长大多位于800-900nm,而水、血液和固有组织发色团对这个波段的光吸收率低,此外散射的激发光子不能激发样品,因此背景第,光损伤小,适用于在体检测。双光子荧光成像技术能准确定位细胞内置入的微电极位置,从而观察胞体、树突甚至单个树突棘的活性。研究者可完整的观察神经组织的分辨荧光图像,甚至可以分辨神经细胞单个树突棘中的钙分布。双光子显微镜已成为较厚有生命体生物组织三维成像中不可或缺的工具。国外bruker双光子显微镜成像视野是多少
双光子显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双(多)光子成像优势在于,具有更深的组织穿透深度,利用红外光,能够在层面检测极限达1mm的组织区域;因信号背景比高,而具有更高的对比度;因激发体积小,具有定点激发的特性,具有更少的光毒性;激发波长由紫外、可见光调整为红外激发,能够更加安全。国内ultimainvestigator双光子显微镜成像视野一般是多少双光子显微镜为什么穿透能力强?
从双光子的原理和特点,我们可以清楚地得出双光子的优点:☆光损伤小:由于双光子显微镜采用可见光或近红外光作为激发光源,因此该波段的光对细胞和组织的光损伤很小,适合长期研究;☆穿透能力强:与紫外光相比,可见光和近红外光的穿透能力更强,因此受生物组织散射的影响更小,解决了生物组织深层物质的层析成像问题;☆高分辨率:由于双光子吸收的截面很小,只能在焦平面很小的区域激发荧光,双光子吸收被限制在焦点处体积约为波长三次方的范围内;☆漂白区域小:由于激发只存在于交点处,焦点外的区域不会发生光漂白;☆荧光收集率高:与共焦成像相比,双光子成像不需要滤光片(共焦),提高了荧光收集率,直接导致图像对比度的提高;☆图像对比度高:由于荧光波长小于入射波长,瑞利散射产生的背景噪声*为单光子激发产生的1/16,减少了散射的干扰;光子跃迁具有很强的选择性激发,因此可以用来对生物组织中的一些特殊物质进行成像;
双光子的来源:飞秒激光的双光子吸收理论早在1931年就由诺贝尔奖获得者MariaGoeppertMayer提出,并在30年后因为激光而得到实验验证,但WinfriedDenk用了近30年才发明了双光子显微镜。要理解双光子的技术挑战和飞秒激光发挥的重要作用,首先要理解非线性过程。双光子吸收相当于和频产生的非线性过程,需要极高的电场强度,电场取决于聚焦光斑的大小和激光脉冲宽度。聚焦光斑越小,脉冲宽度越窄,双光子吸收效率越高。对于衍射极限显微镜,聚焦在样品上的光斑大小只与物镜NA和激光波长有关,所以关键变量只有激光脉冲宽度。基于以上分析,能够输出高重复率(100MHz)的超短脉冲(100fs量级)的飞秒激光已经成为双光子显微镜的标准激发光源。这再次显示了双光子显微镜的优势:双光子吸收只能在焦平面形成,而在焦平面之外,由于光强较低,无法激发,所以双光子成像更清晰。双光子显微镜品牌有哪些?
系统示意图如图1所示,红外激光束从蓝宝石激光器出射后,由一个光学参量振荡器(OPO)转化到可见光波段,产生的可见光脉冲宽度为200fs,重复频率80MHz,波长在490-750nm范围内可调谐。光束通过透镜及平面镜中继到包含微透镜阵列盘和阵列盘的共聚焦扫描单元中,形成用于荧光激发的多焦点光束。多焦点光束通过一个硅油浸润的物镜成像到样品上,激发荧光信号。荧光信号由同一个物镜收集并传输到阵列圆盘,产生共焦效应,隔离来自焦平面外的杂散光。双光子显微镜使用高能量锁模脉冲器。美国investigator双光子显微镜成像视野一般是多少
微型双光子显微镜的优势是。国外bruker双光子显微镜成像视野是多少
n掺杂可以明显影响碳点(CDs)的发射和激发特性,使双光子碳点(TP-CDs)具有本征双光子激发特性和605nm红光发射特性。在638nm激光的照射下,除了长波激发和发射外,还能产生活性氧,这为光动力技术提供了极大的可能性。更重要的是,各种表征和理论模拟证实了掺杂诱导的N杂环在TP-CDs与RNA的亲和力中起着关键作用。这种亲和力不仅可以实现核仁特异性的自我靶向,还可以通过ROS断裂RNA链来解离TP-CDs@RNA复合物,从而在治疗过程中产生荧光变化。TP-CDs结合了ROS产生的能力、PDT过程中的荧光变化、长波激发和发射特性以及核仁特异性自靶向性,因此可以认为是一种实时处理核仁动态变化的智能CDs。国外bruker双光子显微镜成像视野是多少