荧光双光子显微镜光损伤

在深度组织中以较长时间对活细胞成像，双光子显微镜是当前之选。双光子和共聚焦显微镜都是通过激光激发样品中的荧光标记，使用探测器测量被激发的荧光。但是，共聚焦一般使用单模光纤耦合激光器，通过单光子激发荧光，而双光子使用飞秒激光器，通过几乎同时吸收两个长波光子激发荧光。下面是两种技术的对比图。双光子激发荧光的主要优势：双光子比共聚焦使用的更长的波长，所以对组织的损伤更小且穿透更深。共聚焦的成像深度一般为100微米，双光子则能达到250到500微米，甚至超过1毫米。另外，同时吸收两个光子意味只有较强度聚焦点处能被激发，所以不会损伤焦平面之外的组织，并且生成更清晰的图像。微型双光子显微镜的优势是。荧光双光子显微镜光损伤

双光子显微镜为什么穿透能力强？因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题第1个是激发光的减弱，第2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性，单光子激发的背景较强，所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题第1个是激发光的减弱，第2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性，单光子激发的背景较强，所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率刚好双光子在这两点具有很大的优势上面的内容基本在谈到双光子优势都会相对说明，在实际操作中成像的深度和样品的关系很大，双光子成像利用高亮度的荧光标记材料，已经有做到mm级别的穿透深度美国2PPLUS双光子显微镜作用双光子显微镜除了可以进行厚的组织样品拍摄以外呢，可以在小鼠的的任何部位进行成像。

随着技术的发展，双光子显微镜的性能得到不断地优化，结合它的特点，大致可以分成深和活两个方面的提升。要想让激发激光进入更深的层面，大致可从两个方面入手，装置优化与标本改造。关于装置优化，我们可以把激光束变得更细，使能量更加集中，就能让激光穿透更深。关于标本，其中影响光传播的主要是物质吸收和散射，解决这个问题，我们需要对样本进行透明化处理。一种方法是运用某种物质将标本浸泡，使其中的物质（主要是脂质）被破坏或溶解。另一种方法是运用电泳将脂质电解，让标本“透明度”提高。

双光子显微镜的优势：在深度组织中以较长时间对活细胞成像，双光子显微镜是当前之选。双光子和共聚焦显微镜都是通过激光激发样品中的荧光标记，使用探测器测量被激发的荧光。但是，共聚焦一般使用单模光纤耦合激光器，通过单光子激发荧光，而双光子使用飞秒激光器，通过几乎同时吸收两个长波光子激发荧光。下面是两种技术的对比图。双光子激发荧光的主要优势：双光子比共聚焦使用的更长的波长，所以对组织的损伤更小且穿透更深。共聚焦的成像深度一般为100微米，双光子则能达到250到500微米，甚至超过1毫米。另外，同时吸收两个光子意味只有较强度聚焦点处能被激发，所以不会损伤焦平面之外的组织，并且生成更清晰的图像。双光子显微镜已延伸到各个领域研究中，它能对样品进行三维观察。

生物样品的三维观察是了解细胞功能的重要方法之一。目前已有的三维荧光成像技术有光学显微镜、点阵照明和激光扫描显微镜(如共焦显微镜和双光子显微镜)。其中，激光扫描显微镜利用转盘可以进行多焦点激光扫描，提高了时间分辨率，有利于减少活细胞成像中的光损伤。本文主要实现可见光双光子激发和多焦点激光扫描的结合，**终提高三维延迟扫描中的空间分辨率和成像对比度，这也是可见光双光子激发(v2PE)在超高分辨率显微镜中的应用。双光子显微镜大量运营在实验室当中；美国2PPLUS双光子显微镜作用

双光子显微镜观察到的现象证明了钙离子的增加依赖于肌体触发的钠离子作用电势。荧光双光子显微镜光损伤

与普通显微镜相比，电子显微镜可以在更小的尺度上观察事物，冷冻电子显微镜可以观察活性生物大分子。双光子显微镜有什么优势？它能做普通光学显微镜做不到的事情吗？原来双光子显微镜可以准确穿透厚标本进行定点和***观察！因为电磁波的波长越短，粒子越强，散射的影响越大。双光子显微镜将激发光源改为长波长激光，增加了激光的穿透力，同时降低了对细胞的毒性。此外，由于双光子激发效应只能发生在物镜的焦点处，因此扫描精度极高，还可以提高激发光效率，减少扫描点以外的荧光物质的消耗。荧光双光子显微镜光损伤