与花青和罗丹明染料一样,荧光素也是一种有机染料。荧光素的比较大吸收波长为494nm,比较大发射波长为521nm(通常吸收蓝色范围内的光并发射绿色范围内的光),荧光素是一种高荧光物质。即使在非常少量的情况下也可以检测到它,并且在与抗体结合时用于显微镜检查。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。与许多其他荧光染料一样,荧光素价格低廉且易于使用,使其成为生物学研究中很受欢迎的染料之一。与大多数其他染料不同,荧光素在水溶液中是无毒的。因此,它是极少数用作地下水示踪剂的染料之一。DAPI染色液(DAPI Staining Solution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。外泌体荧光染料Cy5
CY5.5-NHS荧光染料是一种广泛应用于生物标记和成像的荧光染料,CY5.5-NHS荧光染料具有优异的荧光性能。其激发波长约为675nm,发射波长约为695nm,位于红色光谱区域,这使得它在生物样本中具有较强的穿透力,能够深入组织内部进行标记和成像。此外,CY5.5-NHS荧光染料具有较高的荧光量子产率和光稳定性,可以在较长时间的激发下保持稳定的荧光信号,从而确保实验结果的准确性和可靠性。CY5.5-NHS荧光染料作为一种***的荧光染料,在生物科学研究领域具有广泛的应用前景。其优异的荧光性能、良好的生物相容性、***的适用范围以及易于合成和修饰的优点,使得它成为生物医学研究中不可或缺的重要工具。外泌体荧光染料Cy5DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料,它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。
选择荧光染料时要考虑那些因素:激发波长处的消光系数应尽可能高:消光系数是衡量可以吸收多少光子的量度。量子产率应该尽可能高:这是吸收光子与发射光子的比率。消光系数和量子产率的乘积就是亮度。荧光染料应该是光稳定的:遗憾的是,比较不同公司染料的光稳定性的研究并不多。光致变色行为:对于STORM实验,您需要一个闪烁的荧光团。但是,对于分子跟踪实验,您***不想要闪烁的荧光团。活/死细胞渗透性。您想要的反应侧基(例如HaloTag、抗体等)。当您使用多个荧光探针时,尤其是当您量化共定位时,请谨慎处理其他颜色通道中的渗色。单独测试所有荧光探针以评估渗透。
在1990年代***使用的绿色荧光蛋白(从水母维多利亚水母克隆)及其衍生物(例如藻红蓝蛋白、藻胆蛋白和藻红蛋白等)是当今生物学研究中**常用的一些生物荧光团。虽然荧光团可用于在细胞、细菌和各种***中表达质粒,但它们的使用有一些缺点,即它可能很耗时,并且在融合时还能够改变某些细胞蛋白的正常生物学功能。此外,与许多其他荧光团相比,生物荧光团的光稳定性和灵敏度较低。绿色荧光蛋白(GFP)绿色荧光蛋白是当下流行的生物荧光团之一,由238个氨基酸组成,其中三个负责发出可见绿色荧光的结构。在水母本身中,荧光团与水母发光蛋白(一种蛋白质)相互作用,当添加钙时会发出蓝光。通过DNA重组,研究人员可以使用负责产生蛋白质的基因来研究给定的基因和蛋白质。在这里,在将复合物插入细胞之前,该基因与另一个基因(负责产生所需蛋白质的第二个基因)结合。如果细胞产生绿色荧光,研究人员就可以明显看出该细胞能够表达目标基因。GFP由488nm激光线激发,可在510nm处检测。来自荧光团的微弱信号可以使用抗GFP抗体放大。作为生物标记物,绿色荧光蛋白用于以下功能:监测各种生理过程*识别蛋白质定位*检测转基因表达D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。
为什么要使用荧光染料?虽然不同的染色技术(即考马斯染色、银染色、荧光染色)可用于可视化凝胶电泳分离的蛋白质,但使用荧光染料具有其独特的优势。他们提供:高灵敏度:对于大多数分析物,荧光测量的灵敏度比吸光度测量高1000倍,即使在使用小样本时也可以令人满意地达到ppt(万亿分之一)的检测限。宽线性动态范围。输出与样品浓度成正比。低干扰:由于吸收光的材料数量众多,分光光度测量通常会遇到干扰问题。在进行荧光测量时不会遇到这个问题,因为只有少数材料具有荧光能力。高通量:荧光测量具有简单而强大的协议,并且可以自动化用于高通量应用。小动物成像荧光染料是一种先进的技术可以在小动物体内实时观察和研究细胞、组织的功能和代谢过程。荧光素钾盐荧光染料红色
D-荧光素钾盐荧光染料。外泌体荧光染料Cy5
管可用于实验室的荧光团数量众多,但这些染料通常属于以下三组之一:荧光染料:这些是用于在体外标记生物相关分子的小型有机天然或合成荧光分子。该组中的一些荧光染料包括荧光素、溴化乙锭和花青。荧光蛋白:这些是较大的、生物制造的蛋白质,由于它们的大分子结构而发出荧光。GFP、RFP和YFP是属于该组的一些染料。量子点:这些高荧光合成纳米晶体由半导体材料制成。随着荧光基本特性的广泛应用和该领域的显着进步,已经针对特定应用和仪器开发和优化了数百种活性荧光染料。同样,多年来,大量复杂的荧光技术(例如,FRET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS)也在不断发展。外泌体荧光染料Cy5